花生过敏原蛋白ara h 6基因克隆和原核表达.pdf

※生物工程 食品科学 2016, Vol.37, No.03 125 花生过敏原蛋白Ara h 6基因克隆和原核表达 1 2 3 1,* 1 詹少德 ，邱昌将 ，朱 盼 ，吴志华 ，陈红兵 （1.南昌大学 食品科学与技术国家重点实验室，中德联合研究院，江西 南昌 330047 ； 2.浙江纺织服装职业技术学院，浙江 宁波 315200 ；3.广东省疾病预防控制中心，广东 广州 510300 ） 摘  要：本实验首先从花生中提取总RNA ，利用反转录聚合酶链式反应技术克隆了花生过敏原蛋白Ara h 6 全 cDNA Ara h 6 pMD19-T Simple BL21 DE3 ，并以此为模板扩增出 目的基因。将目的基因与 质粒进行重组后转入 （ ）宿 主表达菌中，异丙基-β -D-硫代吡喃半乳糖苷诱导产物表达，并利用镍离子亲和层析纯化表达产物。DNA测序结果 Ara h 6 438 bp 145 DNA 97% - 显示 基因片段全长为 ，编码 个氨基酸，与已知该蛋白 序列 相同；十二烷基硫酸钠 聚丙烯 酰胺凝胶电泳结果显示表达产物分子质量为24 kD ，与融合组氨酸标签的重组Ara h 6蛋白理论分子质量相符；质谱 鉴定结果表明重组蛋白的一级结构与天然Ara h 6匹配度为100%；Western blotting结果显示融合蛋白能够为抗Ara h 6 多克隆抗体所识别，具有免疫原性。 关键词：花生；过敏原；Ara h 6 ；基因克隆表达；质谱鉴定 Gene Cloning and Prokaryotic Expression of Peanut Allergen Ara h 6 1 2 3 1,* 1 ZHAN Shaode , QIU Changjiang , ZHU Pan , WU Zhihua , CHEN Hongbing (1. State Key Laboratory of Food Science and Technology, Sino-German Joint Research Institute Nanchang University, , Nanchang 330047, China; 2. Zhejiang Fashion Institute of Technology, Ningbo 315200, China; 3. Center for Disease Control and Prevention of Guangd