生化科技学系微生物与细胞专题讨论.pdf

生化科技學系微生物與細胞專題討論 題目: Sumoylation-promoted Enterovirus 71 3C Degradation Correlates with a Reduction in Viral Replication and Cell Apoptosis. 作者： Shu-Chuan Chen, Luan-Yin Chang, Yi-Wei Wang, Yi-Chun Chen, Kuo-Feng Weng, Shin-Ru Shih,and Hsiu-Ming Shih 文章來源：Journal of Biological Chemistry 286(36): 31373–31384, 2011. 演講人： Chia-Kuei Mo 莫家奎 B97B02010 指導老師： Li-Kwan Chang, PhD張麗冠 博士 演講日期： December 13, 2011 演講地點： The 6th Classroom 摘要 SUMO(small ubiquitin-like modifier)是細胞中與泛素相似的轉譯後修飾蛋 白，可調節細胞中蛋白質功能的表現。腸病毒 71型的 3C蛋白酶 ( EV71 3C ) 在病毒複製以及引發細胞凋亡中扮演重要角色。雖前人在 3C水解酶對於病 毒及宿主蛋白質的作用上已有研究，但宿主細胞因子對 3C的影響則較少探 討。因此本篇作者的目的是要探討宿主細胞的 SUMO修飾對於病毒 3C蛋白 酶及病毒致病力的影響。作者先發現 SUMO的 E2 分子-Ubc9會與 EV71 3C 結合，並造成 3C的 SUMO修飾。之後進一步確認其 SUMO修飾的位置為 Lys-52 。並以3C 基質確認 SUMO修飾會降低其裂解功能。最後證實在生理 條件下， SUMO 缺失的突變株會造成感染後更強烈的症狀。本篇研究提供了 關於宿主細胞對抗腸病毒感染的機制更進一步的了解，宿主細胞對 3C蛋白 酶的 SUMO修飾能影響病毒的複製與宿主細胞的凋亡。 前言  本研究之重要性 腸病毒 3C蛋白酶能將病毒做出的多蛋白前軀物裂解使病毒顆粒得以複製， 並造成細胞凋亡，而本研究發現宿主細胞能對 3C蛋白酶上的 Lysine胺基酸 進行 SUMO修飾以降低病毒蛋白表現，以抑制病毒顆粒的合成，宿主對抗病 毒感染的機制之一，並與感染後的症狀嚴重度相關。 前人作過的研究 小 RNA 病毒屬的成員會用 2A和 3C蛋白酶切割聚蛋白 (polyprotein) 生成病 毒蛋白前軀物（1 ），而大部分裂解由3C蛋白酶作用。之前研究發現 3C另 外還能抑制一些宿主細胞的重要功能，例如：轉錄、細胞骨架完整性和聚 腺苷酸反應 (2-5) 。而前人也發現3C 裂解細胞蛋白會造成細胞凋亡，部分 是由於活化 caspase-3和裂解 PARP(poly-ADP-ribose polymase)造成 (6-8) 。 台灣在 1998-2003腸病毒大爆發時也發現 3C的序列變異性和季節性流行相 關（ 9 ）。因此這些序列變異性是否對腸病毒的致病力有影響就格外重要。 作者為何要作本研究 由於 3C蛋白酶在小 RNA 病毒的蛋白質表現中扮演重要角色，雖前人已有 3C蛋白酶對病毒蛋白及宿主蛋白的相關作研究，但關於宿主的細胞因子 (host cell factor)對其蛋白酶活性的影響則少有研究。本篇作者發現宿主細 胞會造成 3C的 SUMO修飾，並會影響腸病毒病毒顆粒的生成及細胞凋亡， 因此作主著眼探討 SUMO修飾對 EV71 3C蛋白酶的影響，希望對宿主對 抗病毒的機制以及影響症狀嚴重性的原因有更進一步的了解。  本研究欲完成之項目 確定 SUMO修飾會造成 3C蛋白酶的降解之後，作者進一步想確認其 SUMO 修飾的位置， SUMO修飾對蛋白酶功能的影響， SUMO修飾缺失突變株的 致病力改變，以及 3C 突變株與 1998-2003 年間台灣疫情爆發的關連。 材料與方法 質體與抗體 主要以 GFP-3C和 RFP-3C 表現 3C蛋白酶。 使用的抗體： anti-HA,anti-PARP, anti-CREB