转基因作物中常见bt基因pcr检测方法的建立 - 江苏农业科学.pdf

江苏农业科学　２０１７年第４５卷第１２期 — ３１— 邵改革，闫　伟，夏　蔚，等．转基因作物中常见Ｂｔ基因ＰＣＲ检测方法的建立［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（１２）：３１－３４． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．１２．００７ 转基因作物中常见Ｂｔ基因ＰＣＲ检测方法的建立 邵改革，闫　伟，夏　蔚，李葱葱，龙丽坤，李飞武 （吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，吉林长春 １３００３３） 　　摘要：建立基于常见外源基因的转基因成分检测方法是开展转基因生物监测与检测活动的技术支撑，Ｂｔ基因作 为目前商业化应用最广泛的一类外源基因，已成为转基因产品筛选检测的重要靶标。依据转基因作物中常见的６种 Ｂｔ基因（ｃｒｙ１Ｆ、ｃｒｙ１Ｃ、ｃｒｙ１Ｉｅ、ｃｒｙ３４Ａｂ、ｃｒｙ３５Ａｂ、ｖｉｐ３Ａ）的核苷酸序列设计特异性ＰＣＲ引物，并经过特异性、灵敏度等一 系列测试，建立上述６种Ｂｔ基因的定性ＰＣＲ检测方法。结果显示，应用这些方法均可从含有相应Ｂｔ基因的样品中正 确检测出预期转基因成分，方法的灵敏度可达０．１０％。上述方法具有特异性强、灵敏度高等特点，适用于转基因作物 中常见Ｂｔ基因的筛选检测。 　　关键词：转基因作物；Ｂｔ基因；定性ＰＣＲ方法 　　中图分类号：Ｑ７８５　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）１２－００３１－０４ ［１０］ 　　与全球转基因作物商业化蓬勃发展相对应的是人们对于 ＰＣＲ方法 ；有些Ｂｔ基因的ＰＣＲ检测方法已成为国家标准 转基因技术产品的安全性越来越重视。加强转基因产品监 或行业标准［１１－１２］，但未见ｃｒｙ１Ｆ、ｃｒｙ１Ｃ、ｃｒｙ１Ｉｅ等Ｂｔ基因检测 管，已成为世界各国管理转基因技术的一贯做法，开发行之有 方法的报道。 效的检测技术则成了转基因监管技术支撑机构的一项重要工 本研究以抗虫转基因作物中常见的ｃｒｙ１Ｆ、ｃｒｙ１Ｃ、ｃｒｙ１Ｉｅ、 ［１］ 作 。ＰＣＲ技术兼具特异性强、灵敏度高、结果稳定可靠等 ｃｒｙ３４Ａｂ、ｃｒｙ３５Ａｂ、ｖｉｐ３Ａ等６种Ｂｔ基因为对象，建立每种基因 优点，在转基因产品检测方法研究中被广泛应用，根据检测靶 的定性ＰＣＲ检测方法，为转基因生物安全监管提供有效的技 标功能的不同，又分为筛选ＰＣＲ检测、基因特异性ＰＣＲ检测、 术手段。 构建特异性ＰＣＲ检测、转化体特异性ＰＣＲ检测４类，其中基 １　材料与方法 因特异性ＰＣＲ检测方法以转基因作物中的外源目的基因为 ［２］ 检测靶标，是一类常见的转基因产品成分检测方法 。 １．１　材料与试剂 在已商业化应用的转基因作物中，抗虫性是仅次于抗除 转 Ｂｔ基 因 玉 米 ＴＣ１５０７、ＩＥ０３４、５９１２２、ＭＩＲ１６２、 草剂的第二大性状，２０１５年抗虫转基因作物种植面积达到 ＭＯＮ８９０３４、ＭＯＮ８１０、Ｂｔ１１、Ｂｔ１７６、Ｂｔ３８、ＳＫ１２－５、ＭＯＮ８６３、 ２ ８３７０万ｈｍ（包括单一抗虫性状和含有抗虫的复合性状），占 ＭＯＮ８８０１７、ＭＩＲ６０４，转Ｂｔ基因大豆ＭＯＮ８７７０１，转Ｂｔ基因棉 ［３］ 全球转基因作物总面积的４６．６％ 。此外，从我国转基因作 花ＭＯＮ５３１、ＭＯＮ１５９８５，转Ｂｔ基因水稻Ｔ１ｃ－１９、Ｇ６Ｈ１、ＫＦ６、 物研发进展来看，抗虫性是第一大目标性状，除了大规模商业 ＫＭＤ、Ｔ２ａ－１、ＴＴ５１－１，及非转基因玉米、水稻、