胞红蛋白酵母表达载体构建与表达纯化 - 生物探索.pdf

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2017-09-02 发布于天津
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胞红蛋白酵母表达载体构建与表达纯化 - 生物探索

304 Pharmaceutical Biotechnology 2011, 18(4) :304~ 307 * 陶伟娟, 贾晓健, 钱杰, 张玉彬 , 吴梧桐 ( , 210009) , , , PCR NA CYGB pGAPZA GS115, Zeocin PCR , , ; ; ; Q51 A 2011) 0430404 Burester 2002 XhaXho , ( Hemoglo BglpM 18T( Takara) ; Zeocin1640pGAPZA( bin, Hb)(M yoglobin, Mb) ( Neuro Invitrogen) ; NA( Sigma) ;DLiCl( [ 1] BBI) ;Ni NTA( ) , ( ) ,Tricine( Amres globin, Ngb) , , [2] co) ; ::50mM NaH PO , 300mM NaCl, NaOH ( Cytoglobin, CYGB) CYGB 2 4 pH 8.0(Wash Buffer) : 50mol/ L NaH PO , 17q25, 4 3 CYGB 2 4 190 , 21 k, 300 mol/ L NaCl, 10 mol/L , NaOH pH 8.0 Kawada 2001 ( Trade Adjustment ( Elution buffer) : 50 mol/ L NaH PO , 300mM NaCl, 2 4 Assistance, TAA) 250 mol/ L , NaOH pH 8.0 ( Hepatic stellate cell activationassociated H 5() protein, STAP ), HSC 1.2 方法 , , 1.2. 1 CBGY 酵母表达载体构建 LB CYGB , pET28a E. coli BL21 , LB50mL [34] , 37 ,220 r/ min 12~ 16 h, [ 5] CYGBpET28a PCR , , : :CCGCTCGAGCTCGAGAAGAGAAT GG , AGA AAGGCCTAGACTACGGCCCCGAAGA [ 6]