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胞红蛋白酵母表达载体构建与表达纯化 - 生物探索
304 Pharmaceutical Biotechnology 2011, 18(4) :304~ 307
*
陶伟娟, 贾晓健, 钱 杰, 张玉彬 , 吴梧桐
( , 210009)
, ,
, PCR
NA CYGB
pGAPZA GS115, Zeocin
PCR , ,
; ; ;
Q51 A 2011) 0430404
Burester 2002 XhaXho
, ( Hemoglo BglpM 18T( Takara) ; Zeocin1640pGAPZA(
bin, Hb)(M yoglobin, Mb) ( Neuro Invitrogen) ; NA( Sigma) ;DLiCl(
[ 1] BBI) ;Ni NTA( ) , ( ) ,Tricine( Amres
globin, Ngb) , ,
[2] co) ; ::50mM NaH PO , 300mM NaCl, NaOH
( Cytoglobin, CYGB) CYGB 2 4
pH 8.0(Wash Buffer) : 50mol/ L NaH PO ,
17q25, 4 3 CYGB 2 4
190 , 21 k, 300 mol/ L NaCl, 10 mol/L , NaOH pH 8.0
Kawada 2001 ( Trade Adjustment ( Elution buffer) : 50 mol/ L NaH PO , 300mM NaCl,
2 4
Assistance, TAA) 250 mol/ L , NaOH pH 8.0
( Hepatic stellate cell activationassociated H 5()
protein, STAP ), HSC 1.2 方法
, , 1.2. 1 CBGY 酵母表达载体构建 LB CYGB
, pET28a E. coli BL21 , LB50mL
[34]
, 37 ,220 r/ min 12~ 16 h,
[ 5]
CYGBpET28a PCR
, , : :CCGCTCGAGCTCGAGAAGAGAAT GG
, AGA AAGGCCTAGACTACGGCCCCGAAGA
[ 6]
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