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邻二氮菲分光光度法测定微量铁 基础化学实验Ⅳ （仪器分析实验） Northwest University 岛津1700紫外-可见分光光度计的使用（第一次训练） 紫外可见吸收光谱光谱的制作（第一次训练） 工作曲线法（巩固训练） 实验技能训练要点 一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、结果处理 五、思考题 六、实验延伸 一、实验目的 学习确定实验条件的方法，掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。 掌握岛津-1700紫外-可见分光光度计的使用方法，并了解此仪器的主要构造。 根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。 用分光光度法测定试样中的微量铁，目前一般采用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。 二、实验原理 在pH=2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲(phen)生成稳定的桔红色配合物Fe(phen)32+： 此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104 L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下： 2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2+H2O+4H++2Cl- 测定时控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜。用邻二氮菲可测定试样中铁的总量。 仪器：分光光度计(UV1700型) ，50ml容量瓶7个，10ml移液管4支。 三、实验仪器与试剂 100μg·mL-1铁标准溶液: 准确称量0.8634 g NH4Fe(SO)4·12H2O于烧杯中，加入10 mL 浓HCl和少量水，溶解后转移至1 L容量瓶中，以水稀释至标线，摇匀。用时稀释至10μg·mL-1。 0.15%邻二氮菲水溶液，10%盐酸羟胺溶液（新配），1 mol·L-1乙酸钠溶液，1 mol·L-1 NaOH溶液，6 mol·L-1 HCl（工业盐酸试样） 试剂 容量瓶编号 铁标准或样品 盐酸羟胺 邻二氮菲 NaAC 加水稀释至刻度 1 铁标准0ml 1ml 2ml 5ml 2 铁标准2ml 1ml 2ml 5ml 3 铁标准4ml 1ml 2ml 5ml 4 铁标准6ml 1ml 2ml 5ml 5 铁标准8ml 1ml 2ml 5ml 6 铁标准10ml 1ml 2ml 5ml 7 铁样品5ml 1ml 2ml 5ml 标准溶液的配制按下列表格进行 1.启动计算机，打开主机电源开关，开启主机电源，分光光度计进行自检和初始化。初始化完成后，打开主程序，联接主机和计算机。 2. 在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量），本实验选择光谱扫描，设置测量条件（扫描范围，测量波长等）。 3. 将空白放入测量池中，点击START扫描空白，点击ZERO校零。 4. 标准曲线的制作。 UV1700基本操作 吸收曲线的绘制和测量波长的选择： 取上述6号溶液,用1cm比色皿,以试剂空白为参比溶液,设置扫描范围400---600nm,扫速快速, 点击开始进行扫描，扫描结束后得吸收曲线，从吸收曲线上选用最大吸收波长为分析波长。 四、实验步骤 400 500 600 0.100 0.200 0.300 0.400 2. 标准曲线的绘制： (1)标准曲线的制作:取1-6号溶液,用1cm比色皿,以试剂空白为参比溶液,在所选波长下测量吸光度。然后以波长c为横坐标，吸光度A为纵坐标，作图，得标准曲线曲线。 (2)试样测定: 在相同条件下，测定样品的吸光度。 1. 以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择测量的最适宜波长条件。 2. 以铁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。根据试样的吸光度，从由线性回归方程求得含量或在工作曲线上查得含量，计算铁样品中的含铁量（以μg/mL表示），计算测量结果的平均值和相对偏差。 五、数据处理 注 意 事 项 1、配置溶液时使用专用移液管，防止公用溶液污染。 2、配置溶液时严格定容至刻度线。 3、测定吸光度时，每改变一个波长，都应该用空溶液校零。 六、思考题 1. 邻二氮菲分光光度法测定微量铁时为何要加入盐酸羟胺溶液？ 2. 吸收曲线与标准曲线有何区别？在实际应用中有何意义？ 3. 透射比与吸光度两者关系如何？测定条件指哪些？ 4. 邻二氮菲与铁的显色反应，其主要条件有哪些？ 5. 加各种试剂的顺序能否颠倒？ 1、双波长分光光度法的原理：