旋转超滤：一种提取细胞外泌体的新方法 - 生物通.pdf

第二军医大学学报 年 月第 卷第 期 ：／／ ２０１４ ６ ３５ ６ 犺狋狋 狑狑狑．犪狊犿犿狌．犮狀 　　 　　 狆 犼 ·５９８· 　　 ， ， ， ＡｃａｄｅｍｉｃＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｅｃｏｎｄＭｉｌｉｔａｒ ＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔ Ｊｕｎ．２０１４ Ｖｏｌ．３５ Ｎｏ．６ ｙ ｙ ： ／ ·论 著· ＤＯＩ１０．３７２４ＳＰ．Ｊ．１００８．２０１４．００５９８ 　 旋转超滤：一种提取细胞外泌体的新方法 ， １ ２ ２ ２ １ １ ２ １３ 胡国文 ，李 青 ，牛 鑫 ，胡 斌 ，刘 鹃 ，沈晓黎 ，汪 泱 ，邓志锋 　 　 　 　 　 １．南昌大学第二附属医院神经外科，南昌 ３３０００６ ２．上海交通大学医学院附属第六人民医院四肢显微外科研究所，上海 ２００２３３ ３．上海交通大学医学院附属第六人民医院神经外科，上海 ２００２３３ ［摘要］ 目的 建立一种利用旋转超滤技术从骨髓间充质干细胞（ ， ）培养上 ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓＢＭＳＣｓ 　　 　 　 ｙ 清液中分离外泌体（ ）的方法。方法 收集 细胞培养上清，低速离心去除残余细胞， 滤器过滤除去细 ｅｘｏｓｏｍｅ ＢＭＳＣｓ ０．２２ ｍ 　 μ 胞碎片，采用旋转超滤技术提取外泌体。应用透射电子显微镜观察所获外泌体的形态，用蛋白质印迹法检测外泌体标记物 、 蛋白的表达，用 试剂盒检测外泌体对人脐静脉内皮细胞（ ， ） ＣＤ６３ＣＤ９ ＣＣＫ８ ｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓＨＵＶＥＣｓ 增殖活性的影响。结果 使用旋转超滤技术成功分离出ＢＭＳＣｓ分泌的外泌体，透射电镜下外泌体为圆形或椭圆形，直径约 　 ，蛋白质免疫印迹法检测结果显示外泌体中有其特异标记物 、 蛋白的表达。外泌体能够促进 增殖， １００ｎｍ ＣＤ６３ＣＤ９