实验一ph对辣根过氧化物酶的活力的影响.docVIP

实验二 未反应酶失活动力学曲线的制作 一、目的 巩固HRP酶活力测定的方法； 掌握未反应酶失活动力学曲线制作的方法； 进一步熟悉过氧化物酶的特性。 二、原理 酶是一种不稳定物质，常因温度、pH等因素的影响而产生不可逆的活性下降。一般胞外酶较为稳定，而胞内酶在外部环境中容易失活。酶失活，是酶的又一个重要特性。 在一定条件下，使酶溶液恒温保持一定时间，定时取样，然后在pHopt和Topt下，测定残存酶活，以时间为横坐标，相对活力为坐标，绘制的曲线为酶失活动力学曲线。 三、试剂、仪器： 1. 试剂： 酶制剂：辣根过氧化物酶，配制适当浓度。 0.02 mol/L愈创木酚溶液：取0.22ml 愈创木酚加水至100 ml。 0.04 mol/L H2O2溶液：取0.4ml 30% H2O2 加水至100 m l。临用前配制。 pH6.0 0.05mol/L的磷酸缓冲溶液，pH7.0 0.2mol/L的磷酸缓冲溶液。 2. 仪器： 722S分光光度仪 电子天平 恒温水浴锅 秒表 微量可调进样器 离心管等 四、步骤： 取离心管15支，按照1～7的顺序逐管重复两组编号，空白为0号，各管内加入0.5ml 酶液；放入70℃恒温水浴锅内，水浴的热处理时间分别为0、10、20、30、40、50、60、0min，取出后立即用流动水冷却至室温。 在25℃、pH7.0条件下测定其活力。以0号管作空白