重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白异构体鉴定.pdf

第２６卷　第１２期 重 庆 理 工 大 学 学报（自然科学） ２０１２年１２月 Ｖｏｌ．２６　　Ｎｏ．１２ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ｄｅｃ．２０１２  ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－８４２５（ｚ）．２０１２．１２．０１０ 重组白细胞抑制因子和水蛭肽 嵌合蛋白异构体鉴定 刘　巍，范　开 （重庆理工大学 药学与生物工程学院，重庆　４０００５４） 摘　　　要：提出了重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白异构体鉴定检定方法。采用适宜的 质控检测方法，通过试验 ＲＰＨＰＬＣ法、等电聚焦、非还原型 ＳＤＳＰＡＧＥ凝胶电泳法、非变性 ＰＡＧＥ法、活性分析、阴离子交换ＨＰＬＣ分析法对异构体进行定性和定量控制。结果表明：用建 立的ＲＰＨＰＬＣ法、非变性 ＰＡＧＥ法、活性分析法不能鉴别异构体；等电聚焦、非还原型 ＳＤＳ ＰＡＧＥ凝胶电泳法能鉴别异构体，可定性分析；阴离子交换ＨＰＬＣ分析法能对异构体百分含量进 行定量分析。由此表明，等电聚焦、非还原型ＳＤＳＰＡＧＥ凝胶电泳和阴离子交换ＨＰＬＣ分析法 可作为重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白产品中异构体的常规检定。 关　键　词：白细胞抑制因子；水蛭肽；异构体鉴定 中图分类号：Ｒ９７２　　　　文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４－８４２５（２０１２）１２－００４７－０７ ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＬｅｕｋｏｃｙｔｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙＦａｃｔｏｒ ａｎｄＨｉｒｕｌｏｇＣｈｉｍｅｒｉｃＰｒｏｔｅｉｎＩｓｏｍｅｒｓ ＬＩＵＷｅｉ，ＦＡＮＫａｉ （ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００５４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｌｅｕｋｏｃｙｔｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｆａｃｔｏｒａｎｄｌｅｅｃｈｐｅｐｔｉｄｅｃｈｉｍｅ ｒｉｃｐｒｏｔｅｉｎｉｓｏｆｏｒｍｓｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｄｅｔｅｃ ｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ＲＰＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｔｅｓｔ，ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｆｏｃｕｓｉｎｇ，ａｒｅｄｕｃｅｄＳＤＳＰＡＧＥｇｅｌｅｌｅｃ ｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ｎｏｎｄｅｎａｔｕｒｉｎｇＰＡＧＥｍｅｔｈｏｄ，ａｃｔｉｖｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓ，ａｎｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅＨＰＬＣａｎａｌｙｓｉｓｏｆｉｓｏ ｍｅｒｓｏｆｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅａｎｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ．ＵｓｉｎｇｔｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄＲＰＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄ，ＰＡＧＥｍｅｔｈｏｄ ｎｏｎｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ａｃｔｉｖｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｃｏｕｌｄｎｏｔｉｄｅｎｔｉｆｙｉｓｏｍｅｒｓ，ａｎｄｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｆｏｃｕｓｉｎｇ，ａ ｒｅｄｕｃｅｄＳＤＳＰＡＧＥｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｉｓｏｍｅｒｓ，ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓ．Ａｎｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅ ＨＰＬＣａｎａｌｙｚｅｄｉｓｏｍｅｒｓ’ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｙ．Ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｆｏｃｕｓｉｎｇ，ａｒｅｄｕｃｅｄＳＤＳＰＡＧＥｇｅｌｅ ｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｎｄａｎｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅＨＰＬＣａｎａｌｙｓｉｓｃａｎｂｅｕｓｅｄａｓｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｌｅｕｋｏｃｙｔｅｉｎ