项目三紫外-可见分光光度法.pdf

项目三 紫外-可见分光光度法  学习目标 【技能目标】  熟练使用和操作紫外- 可见分光光度计 ；能根据要 用紫外- 可见分光光度计对待检样 品进行定量、定性分析；  学会紫外- 可见分光光度计的日常维护和常规故障排除 ；  对实验数据能进行处理分析，并撰写实验报告；  具有信息迁移能力，能根据不同型号的仪器说明书达到对该仪器的认知及操作。 【知识目标】  理解紫外- 可见分光光度计的工作原理；  掌握分光光度法对样品进行定量分析、定性分析的常用方法；  熟悉紫外- 可见分光光度计的结构和保养、维护及故障排除方法；  掌握定量分析数据处理的方法及仪器分析报告的标准格式和要求。 许多物质是有颜色的，如高锰酸钾水溶液呈紫红色，硝酸镍水溶液呈绿色，无色或浅色 物质也可以通过化学反应生成有色或深色化合物，如二价铜离子与氨生成深蓝色配合物，二 价铁离子与邻二氮菲生成橙红色配合物等。 物质颜色的深浅与物质的浓度有关，显然，浓度越大，溶液颜色越深。因此通过比较溶 液颜色的深浅就可以确定溶液中有色物质含量的多少，这种方法称为比色分析法。比色分析 根据检测方法的不同又分为目视比色法和光电比色法，目视比色法是以人的眼睛检测颜色深 浅 ，进而确定物质含量 ；而光电比色法则是通过光电转换器（光电池）检测颜色深浅 ，来确 定物质含量的。比色分析仅适用于可见光区。 随着近代测试仪器的发展，现今常用分光光度计来测定物质对特定波长光的吸收程度 ， 以确定物质含量，这种方法称为分光光度法。在测定中，根据所利用光波区域的不同，又分 为可见分光光度法（400 ～780nm ）、紫外分光光度法（200 ～400nm ）和红外分光光度法（0.75 ～ 1000m ）等。本项目 中我们只学习可见和紫外分光光度法。 紫外- 可见分光光度法是仪器分析中应用最广的分析方法之一，具有以下特点： （1 ）灵敏度高 化学分析法一般只适用于常量组分的测定，不能测定微量组分，而紫外- 可见分光光度法 5 6 可测10 － ～10 － mol/L ，相当于含量为0.001% ～0.0001%的物质。 （2 ）准确度高 一般比色分析的相对误差为5% ～20% ，分光光度法的相对误差为2% ～5% ，虽不如化学 分析法（0.2% ），但对微量组分分析是符合要求的。 （3 ）操作简便，分析速度快 分光光度法的仪器操作简单，容易掌握。 （4 ）仪器价格低廉，自动化程度高 现代的紫外- 可见分光光度计一般都是数字显示，并且配备有工作站，可以直接对测定数 据进行处理并报告分析结果。 （5 ）应用广泛 大部分的无机离子和有机物都可以直接或间接地用紫外- 可见分光光度法进行测定，随着 灵敏度、选择性更好的显色剂、掩蔽剂的研究，紫外- 可见分光光度法的前景更加诱人。 任务一 吸收光谱曲线的制作 【任务目的】 （1 ）学会吸收光谱曲线的制作； （2 ）比较不同物质吸收光谱曲线，认识不同物质吸收光谱曲线各不相同； （3 ）比较相同物质不同浓度的吸收光谱曲线，认识浓度与吸光度的关系； （4 ）比较相同浓度相同物质 ，采用不同型号吸收池时 的吸收光谱曲线 ，认识液层厚度与 吸光度的关系。 【任务准备】 1 ．仪 器 （1 ）紫外- 可见分光光度计（752 型或 722 型）； （2 ）比色皿（1cm、2cm ）。 2 ．试 剂 4 （1 ）重铬酸钾溶液 ：3.12×10 － mol/L ； 4 4 4 （2 ）高锰酸钾溶液 ：1.56×10 － mol/L 、3.12×10 － mol/L 、4.68×10 － mol/L 、7.80× 4 10 － mol/L 。 【任务内容】