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大肠杆菌 - 中国典型培养物保藏中心
中国典型培养物保存中心
China Center for Type Culture Collection (CCTCC)
大肠杆菌
Escherichia coli CCTCC AB 93154
实验步骤：
1、 将实验菌种在5ml NA 液体培养基中活化，活化的菌种接种于 100ml NA
液体培养基中，37℃摇床中培养，接种后立即取0.1ml 测量OD 值，后连续22h
取菌液测其OD 值，并绘制实验菌株的生长曲线。
2、 将实验菌株细菌在NA 斜面置于37℃培养，斜面生长至12h 时，取菌进
行革兰氏染色，油镜镜检。斜面继续培养至16h 时，同样，取菌镜检。
3、 将菌种接种到生理生化检测培养基中，37℃培养 48h 。检测菌种生理生
化特性。
实验结果：
1. 生长曲线
大肠杆菌
1.2
OD值
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 5 10 15 20 25
时间（h）
图1. 细菌在约11h 左右，增长速率最高。15h 左右进入对数生长后期。根据实验操作方便
取12h 和16h 两个时间点观察。
2. 显微观察
(a) (b)
图2. 对比细菌在12h 和16h 时的革兰氏染色(1000×) ：(a)大肠杆菌12h；(b)大肠杆菌16h。
3. 甲基红实验 （37℃培养48h ）
图3. A 大肠杆菌加甲基红试剂前B 大肠杆菌加甲基红试剂后（阳性） C 产气肠杆菌加甲
基红试剂前D 产气肠杆菌加甲基红试剂后（阴性）
结果说明：培养基变为红色为阳性
4. 吲哚实验 （37℃培养48h ）
图4. A 大肠杆菌（阳性）B 产气肠杆菌（阴性）
结果说明：有红色环状物为阳性。
5. 柠檬酸盐实验 （37℃培养48h ）
图5. A 未接菌空白B 大肠杆菌C 产气肠杆菌
结果说明：黄色说明培养基变为酸性，蓝色说明培养基变为碱性。
6. 伏-普实验 （37℃培养48h ）
图6. A 大肠杆菌（阳性）B 产气肠杆菌（阴性）
结果说明：培养物为红色者为阳性。
7. 硫化氢实验 （37℃培养48h ）
图7. A 大肠杆菌（弱阳性）B 产气肠杆菌（阳性）
结果说明：阳性有黑色硫化铅产生。
8. 产酸实验 （37℃培养48h ）
a. 葡萄糖发酵试验
图8. A 空白对照B 大肠杆菌（阳性）C 变形杆菌（阳性）
b. 乳糖发酵试验
图9. A 空白对照B 大肠杆菌（阳性）C 变形杆菌（阴性）
c. 蔗糖发酵试验
图10. A 空白对照B 大肠杆菌（阴性）C 变形杆菌（阴性）
教学建议：
最佳接种时间：建议前一天17:00 接种，方便第二天9:00 实验课。
最佳观察时间：实验菌株在12h、16h 时，细菌均可用于教学实验使用。
最佳保存条件：不用于实验室时，菌种可于4℃保存2 周左右。
实验教材：
沈萍，陈向东《微生物学实验》4 版. 高等教育出版社.2007, 81-83, 111-120.
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