大肠杆菌 - 中国典型培养物保藏中心.pdf

中国典型培养物保存中心 China Center for Type Culture Collection (CCTCC) 大肠杆菌 Escherichia coli CCTCC AB 93154 实验步骤： 1、 将实验菌种在5ml NA 液体培养基中活化，活化的菌种接种于 100ml NA 液体培养基中，37℃摇床中培养，接种后立即取0.1ml 测量OD 值，后连续22h 取菌液测其OD 值，并绘制实验菌株的生长曲线。 2、 将实验菌株细菌在NA 斜面置于37℃培养，斜面生长至12h 时，取菌进 行革兰氏染色，油镜镜检。斜面继续培养至16h 时，同样，取菌镜检。 3、 将菌种接种到生理生化检测培养基中，37℃培养 48h 。检测菌种生理生 化特性。 实验结果： 1. 生长曲线 大肠杆菌 1.2 OD值 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 5 10 15 20 25 时间（h） 图1. 细菌在约11h 左右，增长速率最高。15h 左右进入对数生长后期。根据实验操作方便 取12h 和16h 两个时间点观察。 2. 显微观察 (a) (b) 图2. 对比细菌在12h 和16h 时的革兰氏染色(1000×) ：(a)大肠杆菌12h；(b)大肠杆菌16h。 3. 甲基红实验 （37℃培养48h ） 图3. A 大肠杆菌加甲基红试剂前B 大肠杆菌加甲基红试剂后（阳性） C 产气肠杆菌加甲 基红试剂前D 产气肠杆菌加甲基红试剂后（阴性） 结果说明：培养基变为红色为阳性 4. 吲哚实验 （37℃培养48h ） 图4. A 大肠杆菌（阳性）B 产气肠杆菌（阴性） 结果说明：有红色环状物为阳性。 5. 柠檬酸盐实验 （37℃培养48h ） 图5. A 未接菌空白B 大肠杆菌C 产气肠杆菌 结果说明：黄色说明培养基变为酸性，蓝色说明培养基变为碱性。 6. 伏-普实验 （37℃培养48h ） 图6. A 大肠杆菌（阳性）B 产气肠杆菌（阴性） 结果说明：培养物为红色者为阳性。 7. 硫化氢实验 （37℃培养48h ） 图7. A 大肠杆菌（弱阳性）B 产气肠杆菌（阳性） 结果说明：阳性有黑色硫化铅产生。 8. 产酸实验 （37℃培养48h ） a. 葡萄糖发酵试验 图8. A 空白对照B 大肠杆菌（阳性）C 变形杆菌（阳性） b. 乳糖发酵试验 图9. A 空白对照B 大肠杆菌（阳性）C 变形杆菌（阴性） c. 蔗糖发酵试验 图10. A 空白对照B 大肠杆菌（阴性）C 变形杆菌（阴性） 教学建议： 最佳接种时间：建议前一天17:00 接种，方便第二天9:00 实验课。 最佳观察时间：实验菌株在12h、16h 时，细菌均可用于教学实验使用。 最佳保存条件：不用于实验室时，菌种可于4℃保存2 周左右。 实验教材： 沈萍，陈向东《微生物学实验》4 版. 高等教育出版社.2007, 81-83, 111-120.