uhs-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及 - 江西农业大学学报.pdf

江西农业大学学报 20 11，33 (6):1202 － 1205 http :/ / xuebao． jxau． edu． cn Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis E － mail :ndxb7775@ sina． com UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染 小鼠成纤维细胞及其鉴定 1 1 1 ，2 1 1 1 1* ， ， ， ， ， ， 王春生 李 晶 宁方勇 张秋婷 梁 洋 朴善花 安铁洙 (1． ， 150040 ;2 ． ， 150030) 东北林业大学 生命科学学院 黑龙江 哈尔滨 东北农业大学 动物科技学院 黑龙江 哈尔滨 : 2S ， 摘要 为了获得转拟蜘蛛拖丝蛋白基因 的阳性小鼠成纤维细胞 本研究将前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖 2S (UHS)， IRES GFP 丝蛋白基因 和克隆获得的小鼠超高硫角蛋白启动子 与带有 序列和 报告基因的表达载体 连接， UHS-2S-pIRES2-EGFP ; UHS-2S-pIRES2-EGFP ， 构建真核表达载体 将 线性化后 采用脂质体法转染小鼠皮 ， G4 18 neo 。 :(1) UHS-2S-pIRES2-EGFP ; 肤成纤维细胞 通过 筛选获得 基因抗性阳性细胞 结果表明 成功构建 (2) G4 18 400 g / mL ;(3) ， 转基因细胞的最佳 筛选浓度为 μ 筛选获得呈梭形的转基因细胞 对其进行传代培养 时， ， “S ” ;(4)PCR ，UHS-2S-pIRES2-EGFP 细胞增殖缓慢 细胞未呈现正常细胞的 型的生长曲线 检测结果显示 载 体已经整合到G4 18 抗性细胞的基因组中。 : ; ; ; ; 关键词 蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体 超高硫角蛋白启动子 真核表达载体 小鼠成纤维细胞 转基因 中图分类号:Q781 文献标志码:A 文章编号:1000 － 2286 (2011)06 － 1202 － 04 Identification of Transgenic Mouse Fibroblasts with UHS-Polymerized Spider Dragline Silk Protein Gene (2S)