ACE抑制剂Ramipril对大鼠急性心肌梗死后心肌细胞凋亡、左室重构影响的分析.pdfVIP

垒￡堡塑型型曼型P型型盔墼叁丝：堂些塑壅厦：鱼些塑堕塑圭：垄童重丝墅堕盟蟹塞 ACE抑制剂Ramipril对大鼠急性心肌梗死后 心肌细胞凋亡、左室重构影响的研究 专 业：心血管内科 硕士生：马莉 指导教师：麦炜颐副教授 中文摘要 急性心肌梗死是严重危害人们健康的一种疾病。流行病学资料显示，美国每 年有100多万人发生心肌梗死，其中近l／3发展为心力衰竭【l】。心肌梗死后心力 衰竭发生的核心基础在于心肌细胞的大量死亡及心肌梗死后的心室重塑。研究表 明，心肌细胞凋亡在急性心肌梗死后的心室重塑及心力衰竭中起着重要的作用 [3-51。因此目前心肌梗死后心肌细胞凋亡及心室重塑的防治成为研究的热点。 肾素一血管紧张紊系统(RAS)的过度激活，血管紧张素II(AngII)的过度 产生是心肌梗死后心肌细胞凋亡和心室重塑的重要因素。血管紧张素转换酶抑制 剂(ACEI)对该系统的干预能显著改善心肌梗死患者的心功能状态及预后，已 成为急性心肌梗死的一线治疗药物。本课题通过给予试验性心肌梗死大鼠短程的 ACEI(雷米普利，Ramipril)治疗，观察其对心梗后心肌细胞的凋亡及心室重塑 的影响，探讨其可能的机制。 研究目的 本课题拟通过结扎雄性Wister大鼠的左冠状动脉，制成急性心肌梗死模型， 然后给予两周的雷米普利干预治疗，观察霄米普利对大鼠血管紧张素Ⅱ水平、 血流动力学及心肌细胞凋亡和心室重构的影响，同时对凋亡相关基因Fas—L的转 录水平进行半定量测定，并且分离心肌细胞，在电刺激起搏下，应用激光扫描共 聚焦显微镜观察心肌细胞内游离钙离子的水平。旨在：(1)研究急性心肌梗死时 雷米普利短期干预对心肌细胞凋亡及心室重构的影响；(2)了解急性心肌梗死时 雷米普利短期干预对凋亡相关基因Fas．L的转录水平的影响；(3)观察急性心肌 梗死时，ACEI短期干预对心肌细胞内游离钙离子水平的影响。 ACE抑制剂Ramipril对大鼠急性心肌梗死后心肌细胞凋亡、左室重构影响的研究 研究方法 1．大鼠急性心肌梗死模型的制作通过结扎雄性Wistar大鼠(8周龄，体重200 ．2509)左冠状动脉，造成急性心肌梗死模型。 2．实验分组和步骤 术后24小时，将急性心梗大鼠随机分成心梗治疗组和心梗对照组(各11只)， 并设假手术对照组。通过灌胃的方法每天给予心梗治疗组雷米普利(2．5mg／kg， 用生理盐水溶解)，而心梗对照组和假手术对照组则用生理盐水代替。持续两周 后从各组存活的大鼠中随机选取4只，用于分离心肌细胞，进行细胞内游离钙离 子水平的测定。其余进行血流动力学测定，取循环血进行血管紧张素Ⅱ水平的 测定，并取左心室肌进行心肌细胞凋亡的检测及凋亡相关基因Fas．L的mRNA 水平的半定量分析。 3．血管紧张素Ⅱ水平的测定 用放射免疫法测定血浆血管紧张素Ⅱ含量。 4．心肌细胞凋亡的检测 心肌细胞凋亡的原位检测应用末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺 dUTPnickend 口末端标记法(TdT-mediatedlabeling，TUNEL)原位标记凋亡的 心肌细胞核。 5．成年大鼠心肌细胞的分离及细胞内游离钙离子水平的测定 成年大鼠的心肌细胞通过主动脉灌流的方法应用胶原酶I进行分离。分离完 后用钙荧光探针Hun．3／AM进行负载，然后在相同频率(1赫兹)电刺激起博下， 用激光扫描共聚焦显微镜动态记录单个心肌细胞内的荧光强度(F)变化。并按 【Ca。+l=Kd×(F-Fmin)／(Fmax-D 计算细胞内游离钙离子的浓度(nmol／L)。其中Fmax为每次实验测定完成后加 入钙离子载运体A2M87(终浓度为lOlaM)，使荧光指示剂饱和后所测得的细胞内 肌细胞的最小荧光值。Kd为一常数，37C为450nmol／L。 6．凋亡相关基因Fas—LmRNA表达的半定量分析 录水平。 Ⅱ ACE抑制剂Ramipril对大鼠急性心肌梗死后心肌细胞捅亡、左室重构影响的研究 实验结果 1．ACE[干预对实验性心梗大鼠心功能的影响 应用雷米普利干预两周后，经血流动力学测定，假手术组、心梗对照组和