B6杨花药培养分析.pdfVIP

摘要 摘要 B6杨是小黑杨雌株天然授粉而得，为雄株。B6杨继承了小黑杨适应性广泛、速生、 抗寒、耐旱、抗病虫、树干通直圆满、材质洁白等优点，而且其生长速率比小黑杨提高 20％以上。本实验研究了温度、光照、生长调节物质、低温处理、蔗糖浓度、培养容器 对B6杨花药再生植株的影响；利用流式细胞仪(PA)对花药组培苗叶片进行倍性分 析，同时对小黑杨SSR--PCR反应技术体系进行优化。 主要实验结果如下： 1．组织培养方面的研究表明：温度和光照对小黑杨花药愈伤诱导和不定芽诱导影响显 著。暗培养有利于愈伤组织的诱导，光照有利于不定芽的分化；愈伤组织诱导和不定芽 诱导最佳温度为25C。愈伤组织诱导培养基为：1／2MS+2．0 mg·L．12，4．D+0．5mg·L-1KT +30 mg·L。1 g·LJ蔗糖，诱导率最高达到89．2％；诱导不定芽最佳培养基为：1／2MS+0．5 BA+0．05 g·L．1蔗糖，不定芽诱导率最高达85．4％。生根培养基为： mg·LoNAA+20 定芽的诱导率的趋势是玻璃培养瓶中明显高于塑料瓶的诱导率。 2．流式细胞仪倍性分析表明：采用流式细胞仪对花药培养植株进行鉴定发现花培植株 分别为单倍体，二倍体，四倍体，二、三、四混倍体植株，单倍体为2．3％，四倍体 5．7％，混倍体3．4％，二倍体88．5％占绝大多数。 3．小黑杨B6 Mm (M92+free)，1．0止dNTP(2．5each)，0．2此Taq酶(2．5U／lxL)，2．0此each引 s，72 s，50--58℃退火30 物。反应程序：94℃预变性3min，循环一次；94℃变性30 ℃延伸1rain，循环34次；最后72℃延伸5min。对所选取得的5对引物进行筛选，筛 选WPMS09这对引物带型清晰，重复性好，稳定性高。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳得出 PCR产物的最佳上量为3皿。 关键词小黑杨：花药培养；SSR Abstract ■基鼍—■——■■置詈詈量—■————詈置—量暑皇鲁暑詈毫葛宣皇詈皇—●———■——■—■■——■墨■E昌詈葛詈鼍皇暑量皇■■—●■———詈—置—|宣置鼍置置墨皇一I———■———量—置—宣皇昌詈|暑盲昌—詈■■————■l Abstract simonii male fromfemale PopluLusxnigra“B6”，atree，derive PopgLus simonii natural inheritedthe of xp．nigra)by pollination．PopBL璐B6advantage xxiaohei，wide and PoplxLus trunk SO more andwhitematerialand its rateincreases on,and pestsresistant，straight growth than wit