铅的极谱络合吸附波法检测dna特定序列.pdf

第 3O卷 第 2期 青 岛 科 技 大 学 学 报 (自然科学版) Vo1．30No．2 2009年 4月 JournalofQingdaoUniversityofScienceandTechnology(NaturalScienceEdition) Apr．2009 文章编号 ：1672—6987(2009)02—0095—06 铅的极谱络合吸附波法检测 DNA特定序列 张 波，刘 鹤。焦 奎 ，付 洵 ，孙 伟 (青岛科技大学 化学与分子工程学 院，山东 青 岛 266042) 摘 要 ：应用极谱络合吸附波方法检测了草丁膦 乙酰转移酶基 因(PAT基 因)的DNA特 定序列。用水热法合成表面具有 自由羧基 的硒化铅 (PbSe)纳米粒子，以乙基一(3-二 甲基 丙基)碳二亚胺盐酸盐 (EDC)为偶联 活化剂 ，将其标记于合 成的 5端氨基修饰 的寡聚核 苷酸片段上 ，制成 DNA探针 ，用于检测互补 的 目标 DNA序列。以十六烷基三 甲基 溴化 铵 (CTAB)阳离子表面活性剂修饰 的碳糊 电极作为基底 电极 ，通过静 电作用将来 自于 PAT基 因的 目标 DNA 特 定序 列 固定在 电极表 面，并与标记有 PbSe纳米粒子 的互补 DNA探针 杂交。以铅一铜铁试剂一六次 甲基四胺一HAc极谱络合吸 附波测定氧化溶解 Pb— Se得到的Pb抖，成功检测 了PAT基 因的DNA特定序列。测定 目标 DNA 的线性 范围为 1．0×10 至 1．0×10 mo1．L～ ，检 测 限为 8．7×10 。mo1·L (3a)。此 方 法 测定 目 标 DNA序列检测限低 ，灵敏度高，线性 范围宽，重现性好，操作 简捷方便 ，对 互补和非互 补序列具有很好的识别能力。 关键词 ：DNA检测 ；极谱络合吸附波 ；硒化铅纳米粒子 ；DNA 杂交；PAT基 因 中图分类号 ：O657．1 文献标识码 ：A Detection forDNA SpecificSequencesUsingthe POlarOgraphicComplexAdsorptiveW aveofPb ZHANG Bo，LIU He，JIAo Kui，FU Xan，SUN W ei (CollegeofChemistryandM olecularEngineering，QingdaoUniversityofScienceandTechnology，Qingdao266042，China) Abstract：Thepolarographiccomplex adsorptivewavewasfirstlyusedto detectDNA specificsequencesofthephosphinothricin acetyltransferase(PAT)gene．Leadselenide (PbSe)nanoparticlesurface—modifiedbyfreecarhoxylwashydrothermallysynthesized。 andusedasamarkertolabeltheDNA probeforidentifyingcomplementarytargetDNA sequence．Sequence—specificDNA relatedtothePAT genewasusedastargetDNA se— quenceandimmobilizedelectrostaticallyoncetyltrimethylammonium bromide (CTAB) modifiedcarbonpasteelectrode(CTAB／CPE)，andfurtherhybridizedwiththecomple- mentaryprobeDNA labeled with PbSenanoparticles．Thehybridization eventswere monitoredbytheoxidationdissolutionofIeadselenideanchoredonthehybridsandPb—