拟南芥细胞异三聚体g蛋白的分离纯化 - 广西植物.pdf

维普资讯 广 西 植 物 Guihaia 28(2)：269— 272 2008年 3月 拟南芥细胞异三聚体 G蛋 白的分离纯化 谢 虹，杨飞武，郭 莹，梁建生 (扬州大学 生物科学与技术学院，江苏 扬州 225009) 摘 要：以拟南芥哥伦 比亚 Columbia(Col—O)野生型悬浮培养细胞为材料 ，采用超声波破碎 、匀浆、离心、4O ～ 6O 饱和度硫酸铵分步沉淀 、SephadexG-25脱盐 、DEAE—SepharoseFastFlow离子交换、SephadexG-200 凝胶过滤，最后经过 SepharoseCL-6B得到纯化的目的蛋白，蛋白收率为0．097 。纯化的蛋 白质经非变性聚 丙烯酰胺凝胶 电泳鉴定显示为一条带，经Westernblotting证实为 G蛋白。把经Native—PAGE鉴定的蛋白质 的条带 回收，进行SDS—PAGE显示有 3条带。一条是 Ga亚基，其分子量为60kDa左右；另外 2条带分子量为 45kDa和 35kDa，可能是 p、7亚基 ，初步证实拟南芥 中存在异三聚体 G蛋 白。G蛋白提取方法 的建立为在基 因突变型拟南芥 中G蛋白功能的研究奠定基础。 关键词：拟南芥；异三聚体 G蛋白；亚基；纯化 中图分类号 ：Q946．1 文献标识码 ；A 文章编号 ：1000—3142(2008)02—0269—04 SeparationaannddpurificationOoftG pprrootteeiinn from Arabidopsisthaliana XIEHong，YANGFe卜Wu，GUOYing，LIANGJian-Sheng (CollegeofBioscienceandBiotechnology，YangzhouUniversity，Yangzhou225009，China) Abstract：Gproteinwaspurifiedfrom thesuspendedculturedwide-typecellofArabidopsisthaliana (Col—O)byul— trasonicfragmentation，homogenization，centrifugation，40 ～6O saturationAmmonium sulphatesedimentation，gel filtration(SephadexG-25，SephadexG-200，SepharoseCL_6B)andDEAE-SepharoseFastFlow ionexchangechro— matographer．Theresultidentifiedbynon-denaturedPAGEshowedonebandinthegelandW esternblottinganalysis confirmedthattheproteinwasG protein．ThetargetproteinafterNative_PAGEwascollected，anditdisplayedthree bandsafterSD PAGE．ThefirstbandwasQsubunit，anditsMW wasabout60kDa．Thesecondandthirdbands whichwere45kDaand35kDa，werepresumedtObethepand7subunits．ThepurificationmethodofGproteinwill facilitatefurtherfunctioninvestigationofGproteininmutant-tpyecellofA．thaliana． Keywords：Arabidopsisthaliana；heterotrimericG proteins；subunit~purif