铁蟹过敏原的分离、鉴定和快速纯化 - 核农学报.pdf

核 农 学 报 　2009 ,23 (5) :839～842 839 　 J ournal of N uclear Agricultural Sciences ( ) 文章编号 2009 0583904 铁蟹过敏原的分离 、鉴定和快速纯化 1 ,2 3 1 2 1 2 2 张明琦 　支玉香 　吕淑霞 　李淑荣 　董晓颖 　潘家荣 　高美须 ( 1 沈阳农业大学生物科学技术学院 ,沈阳 辽宁　110161 ; 2 中国农业科学院农产品加工研究所 ,北京 　100193 ; 3 北京协和医院变态反应科 ,北京 　100052) ( ) 摘 　要 :应用免疫印迹 Western blot 的方法鉴定铁蟹过敏原组分 ,然后利用电泳洗脱的方法快速纯化主 ( 要过敏原 。取磷酸盐缓冲液制备的铁蟹 肉浸 出液 , 经十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶 电泳 SDS ) PA GE 分离 ,测定各组分的相对分子量 ,然后利用 18 例蟹过敏患者的血清进行免疫印迹 ,鉴定出主要和 次要过敏原 ,利用普通垂直电泳槽快速洗脱主要过敏原蛋白,并鉴定活性 。结果显示 ,SDSPA GE 显示铁 蟹肉可辨条带有 16 条 ,相对分子质量在 165～168kD 之间。Western blotting 结果表明 ,铁蟹肉浸出液共 有 10 条过敏条带 ,其中相对分子质量为 76kD 的蛋白条带 , 阳性反应率为 100 % ,纯化后获取了 76kD 的 主要过敏原 ,经过免疫印迹鉴定其具有免疫活性 。表明相对分子质量 76kD 的组分为铁蟹主要过敏组 分 ,快速电洗脱可以纯化相对分子量为 76kD 的过敏原组分 。 关键词 :铁蟹肉;过敏原 ;十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 ;免疫印迹 ;蛋白质纯化 ALL ERGEN SEPARATION, IDENTIFICATION AND RAPID PURIFICATION FROM IRON CRAB 1 3 1 2 1 2 2 ZHAN G Mingqi 　ZHI Yuxiang 　LU Shuxia 　L I Shurong 　DON G Xiaoying 　PAN Jiarong 　GAO Meixu ( 1. College of B ioscience and Technology , Sheny ang Agricultural University , Sheny ang , L iaoning 　110161 ; 2 . Institute of Agrof ood Science Technology , Chinese Academy of Agricultural Sciences , Beij ing 　10019