探讨改善环状糊精葡萄糖基转移酶特性及连续生产β-环状糊精条件李旭杰.pdf

探討改善環狀糊精葡萄糖基轉移酶特性及連續 生產β-環狀糊精條件 李旭傑 (5109) 02/24/2016 大綱 一、前言 二、利用突變增強 Bacillus sp . 來源之環狀糊精葡萄糖基轉移酶對 β-環狀糊精的 特異性 三、利用聚乙二醇提高 Bacillus sp . 來源環狀糊精葡萄糖基轉移酶之熱穩定性 四、使用幾丁聚醣固定化高穩定環狀糊精葡萄糖基轉移酶連續生產 β-環狀糊精 五、結論 摘要 環狀糊精 (cyclodextrin, CD) 為以 α-1,4 鍵結之環狀寡醣，其構型是中空的 圓錐體， 表面具有親水性，內面則為疏水性，因此可溶於水，而在內部疏水特性 能夠承載疏水性分子形成複合物，此特性可用於不同的用途 ，如保護芳香物質或 其他敏感成分及控制食品成分釋放等 ，環狀糊精葡萄糖基轉移酶 (cyclodextrin glycosyltransferase, CGTase)可將澱粉藉由分子內糖基轉移作用轉換成環狀糊精， 可應用在食品等 工業上。本次報告擬探討提升 CGTase 對產物 β-CD的 特異性、 熱穩定性及固定化 以提升 β-CD 產量。原生型 CGTase會產出 α-CD 、β-CD 、γ- CD的混合物，可利用突變來提升 β-CD 產量降低分離成本 ，並加入聚乙二醇 (PEGs) 來提升 CGTase 熱穩定性，最後探討將 CGTase 以共價方式固定化於幾 丁聚醣球體上並利用充填床反應器來連續生產 β-CD 。結果顯示 A31R 、A31P 及 A31T的突變可增加 β-CD 生成量，表示這些突變增強 CGTase的 β-CD 特異 性。尤其是 A31R ，比原生型CGTase 增加約 26% β-CD 產量。而加入 10-15% PEG 400可增加約 20%的 CGTase 活性，螢光光譜及圓二色光譜分析分別顯 示 PEGs可保護 β-CGTase的三級和二級結構， 15% PEG 1000 在 60 ˚C 下比 未添加延長 6.5 倍的半衰期。最後在充填床反應器中，流速及基質濃度會影響 β-CD的產量，最適基質濃度 4% (w/v) ，且在流速3 mL/min 下有最高的 β-CD 產率，連續反應 52 小時後活性降為原來的 78% ，但若用緩衝溶液清洗幾丁聚 醣球體，可回復 至初始活性，此活性可維持 50 小時。 參考文獻 1. Astray, G., Gonzalez-Barreiro, C., Mejuto, J., Rial-Otero, R., Simal-Gándara, J. 2009. A review on the use of cyclodextrins in foods. Food Hydrocolloids, 23(7), 1631-1640. 2. Azevedo, A., Cabral, J., Prazeres, D., Gibson, T., Fonseca, L. 2004. Thermal and operational stabilities of Hansenula polymorpha alcohol oxidase. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 27( 1), 37-45. 3. Chang, S.-W., Shaw, J.-F., Yang, C.-K., Shieh, C.-J.