尿试料の反复冻结解冻による体内酸化的ストレスレベル指标 8-hydroxy-2.pdf

｢労働安全衛生研究｣, Vol. 2, No.2, pp.79-84, (2009) 原著論文 尿試料の反復凍結解凍による体内酸化的ストレスレベル指標 † 8-Hydroxy-2’-Deoxyguanosine (8-OH-dG)の安定性 *1 *1､2 *2 *3 松 本 由 紀 小 川 康 恭 吉 田 吏 江 大 場 謙 一 我々は，尿試料への反復凍結解凍負荷が 8-hydroxy-2’-deoxyguanosine （8-OH-dG）の安定性へ及ぼす影響 を検討した．使用保存試料は 102 試料（男 85 名，女 17 名，年齢 22 歳～79 歳）であった．尿中 8-OH-dG 濃度 の測定は HPLC による二段階分離法にて測定した．初回凍結解凍尿と 2 回目凍結解凍尿の比較では（n=82），尿 中8-OH-dG 濃度はそれぞれ 5.4 ± 2.8 ng/ml， 5.2 ± 2.8 ng/ml であり対比較で有意な差は認められなかった．回 帰分析では，ｘを初回凍結解凍尿中 8-OH-dG 濃度，y を2 回目凍結解凍尿中 8-OH-dG 濃度とすると，y = 0.97 x - 0.04 (R2 =0.91，p0.01)であった．次に，初回凍結解凍尿と 3 回目凍結解凍尿の比較では （n=20），尿中 8-OH-dG 濃度はそれぞれ 5.9 ± 5.0 ng/ml， 6.2 ± 5.1 ng/ml であり，これも対比較で有意な差は認められなかった．回帰分 析では，ｘを初回凍結解凍尿中8-OH-dG 濃度，y を 3 回目凍結解凍尿中 8-OH-dG 濃度とすると，y = 1.0 x + 0.29 (R2 =0.96，p0.01)であった．本研究結果より，尿中 8-OH-dG 測定においては保存尿試料の反復凍結解凍は 3 回 までであれば値が安定であることが示された． キーワード : 酸化的ストレス，8-ハイドロキシ-2’-デオキシグアノシン，尿，高速液体クロマトグラフィー，電 気化学検出器，凍結解凍 1 はじめに 本研究目的に必要なサンプルサイズを算出した．母平 体内における酸化的ストレスレベルの指標として酸化 均の差を検定する為に必要なサンプルサイズは，母分散 的核酸損傷マーカーである尿中 8-hydroxy-2’- 未知の片側検定（µ ＞µ0）の場合 deoxyguanosine （8-OH-dG）量が広く用いられている． 2 2 ⎛ Z − Z1 ⎞ Z この尿中8-OH-dG 量は，職場における化学物質曝露に n ≈ ⎜ α −β ⎟ + α ∆ 2 よる酸化的ストレスレベルの指標としても有効であり， ⎝ 0 ⎠ 実際にアスベスト使用労働者ではクレアチニン量で補正 となる9)．ここで△ は， |µ －µ0 |/σ ≥ △ となるよう 0 0 した尿中