急性髓细胞白血病组蛋白乙酰化修饰及其对过氧化还原酶基因表达的 .pdf

生堕堕苎垒：墨 生 !旦箜41卷第9期下半月 ShanxiMedJ，September2012，Vo1．41，No．9theSecond ·895． 急性髓细胞 白血病组蛋 白乙酰化修饰 及其对过氧化还原酶基因表达的调控作用 中国医科大学附属盛京医院(110004) 燕 玮 胡文旭 杨 威 【摘 要】 目的 探讨急性髓细胞 白血病 (AML)患者组蛋 白乙酰化修饰规律 ，并研究组蛋 白乙酰化对过氧 化还原酶 (PRDX2)基 因差异表达 的调控作用 。方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应 (PCR)技术检测 55例 AML患者和 2O例非 白血病患者单个核细胞 (MNC)的 PRDX2mRNA 的表达 ，应用蛋 白印迹法检测 乙酰化 H3 表达情况 。结果 AML组 mRNA表达量较对 照组 明显下 降，差异有统计学意义 (t一一4．89，P0．05)；2组 乙 酰化 H3相对表达量为 2．2±1．0，3．2±0．9，差异有统计学意义 (￡一一3．94，P％0．05)；AML组患者组蛋 白H3 乙酰化水平与 PRDX2基 因mRNA呈正相关 (r一0．358，P一0．007)。结论 AML患者 的组蛋 白乙酰化呈低表 达现象，组蛋 白乙酰化在 AML患者中对 PRDX2基因差异表达具有调控作用 。 【关键词】 白血病 ，髓样 ； 组蛋 白乙酰化 ； PRDX2 白血病的发生是一个复杂的、多步骤的过程 ，其 洗涤 2次 ，所得 MNC用于提取总 RNA和总蛋 白。 发生是细胞遗传和表观遗传改变 的结果口]。过氧 1．3 实时荧光定量 (RT_PCR)检测 PRDX2mRNA 的表 化还原酶 (PRDX2)作为一种抗氧化蛋 白，通过清除 达 ：采用 TRIzol一步法提取骨髓 MNC总 RNA，紫外分光 光度仪测定 260，280nm吸光度值 (A)，计算 RNA含量。 活性氧 (ROS)，保护 DNA、脂质、蛋 白免受氧化应 利用逆转录 (RT)试剂盒 (美 国Promerga公司)对上步实验 激损伤 ，调节信号传导通路。作为一种抑癌基因， 所得的RNA样本进行反转录以得到对应 的eDNA。利用 急性髓细胞 白血病 (AML)与 PRDX2基 因的失活 ABIPRISM 70OOHT荧光定量 PCR仪 (美 国，ABI)进行荧 及组蛋 白乙酰化修饰有着密切关系 ]。然而 ，在 光定量分析。引物设计见表 1。反应体系：eDNA模板 1 AML的发病过程 中，PRDX2基因如何失活，组蛋 ffL、上下游 引物 (10t~mol／L)各 0．5 “L、SYBRGREEN 白乙酰化修饰是否对 PRDX2基因的表达起作用， rnastermix10 L，用 ddH20补足反应总体系至 2O L。反 鲜见报道 。本研究拟探讨 AML患者 中组蛋 白乙 应条件 ：95℃预变性 10min，95℃ 热启动 5min，95℃ 变 酰化规律 ，并探索组蛋 白乙酰化对 PRDX2基 因差 性 20S，60℃退火延伸 60S。40个循环 ，6O℃延伸时采集 异表达的调控作用。 荧光信号，用焦碳酸二 乙酯 (DEPC)水代替 eDNA作为阴性 1 材料与方法 对 照 。采用 ABI7500系统软件 ，通 过相对定量 (relative 1．1 标本来源 ：收集 2011年 1月至 2012年 4月中国医科 quan