什么是细胞凋亡.doc

细胞凋亡研究实验手册 目录 1 凋亡分析策略与产品的选择指南. 2 常用凋亡检测产品和方法 2.1 凋亡形态学检测试剂盒系列（荧光/光学法） 2.2 Annexin-V-FITC/EGFP检测试剂盒. 2.3 TUNEL 凋亡原位检测试剂盒 2.4 DNA LADDER 检测试剂盒. 2.5 细胞DNA含量检测试剂盒（细胞周期）. 2.6 Caspase 活性检测试剂盒 . 2.7 线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1） 2.8 端粒酶活性检测试剂盒.. 2.9. 凋亡与氧化应激检测. 2.10 凋亡相关蛋白检测（蛋白定量、蛋白抽提、WB ECL.产品简介） 2.11 凋亡相关基因检测（分子生物学产品产品简介）. 附1：流式细胞仪和荧光显微镜的使用方法 附2：常用凋亡诱导剂 附3 不同荧光试剂检测波长表. 附4 凋亡相关试剂盒选择参考 1 凋亡分析策略与产品的选择指南 凋亡分析总体原则： 1） ： 二：按照凋亡发生的时间顺序检测 附图2 凋亡不同时期发生的分子事件 凯基相关产品：1 诱导凋亡：凯基凋亡诱导剂 2 受体活化：凯基膜蛋白抽提试剂盒/WB相关产品 3 细胞色素C检测试剂盒 4 线粒体膜电势降低： 线粒体膜电位检测试剂盒（JC-~1） 5 Caspas的活性： Caspas 3 8 9 2 6等化学发光法检测试剂盒 6 细胞膜磷脂酰丝氨酸PS暴露：Annexin v —FITC/EGFP检测试剂盒 7 形态学改变：凯基凋亡形态学检测试剂盒（光学或荧光用） 8 DNA片断化：TUNEL和DNA Ladder检测试剂盒 四 根椐实验材料类型选择检测方法和产品 （详见附录5） 实验材料类型 检测方法或产品 1 细胞 ： Annexin v —FITC/EGFP， Caspas，JC-~1，TUNEL，DNA Ladder等均可使用 2 新鲜组织 Caspas，WB等相关产品 3 冷冻组织 Caspas ，TUNEL，WB等相关产品 4固定组织 石蜡切片： TUNEL法，免疫组化法 三 按照凋亡发生的细胞位点及信号通路检测 细胞位置 凋亡事件 凯基相关产品 细胞膜 1磷脂酰丝氨酸PS暴露 2 膜上受体 1 Annexin v —FITC/EGFP检测试剂盒 2凯基膜蛋白抽提试剂盒/WB/IP等相关产品 细胞质及细胞器 1 线粒体膜电位 2 Caspas的活性 3 细胞色素C 3 其它信号分子 1线粒体膜电位检测试剂盒（JC-~1） 2 Caspas 3 8 9 2 6等化学发光法检测试剂盒 3 无 4凯基全蛋白抽提试剂盒/WB/IP等相关产品 细胞核 DNA3`-OH端断裂暴露 DNA断裂成小片断形成 TUNEL DNA Ladder DNA含量（Cell cycle）检测试剂盒 Hochest DAPI PI EB等DNA染料 附表3：Caspase 的靶分子 Caspase 的靶分子大约有100多个底物，根椐其作用可分为四大类，多种作用导致凋亡发生。 靶分子的类别 靶分子（底物） mediators and regulators of apoptosis, Bid，(DFF45/ICAD)，NDUFS1, Bcl-2 and Bcl-Xl, IAPs FLIPL, AKT, FAK and RIP. ROCK1 kinase, PAK2 (p21-activated kinase 2 and MEKK1). structural proteins, Fodrin gelsolin actin filament nuclear lamins intermediate filament proteins (keratins 18and 19, vimentin) adherence junction proteins ?-catenin and plakoglobin ?-catenin cellular DNA repair proteins, DNA- dependent protein kinase (DNA-PK), Rad51 and ATM proteins cell cycle-related proteins. Cdc27, Wee1, and two Cdk inhibitors, p21CIP1 and p27KIP1.48,49 表1 各主要信号通路上的重要信号分子 信号通路 通路 外源或内源信号分子 膜受体