定量聚合酶链反应评价去白细胞滤器去除血液成分中巨细胞病毒的效果.pdfVIP

微生物 与感染 2009 年 3 月 第 4 卷第 1 期 Journal of Microbes and Infection, March 2009, Vol. 4 , No. 1 ·13 · 定 量 聚 合酶链 反 应 评 估去 白细胞 滤 器去 除 血 液 成 分 中 巨细胞 病 毒 的效 果 1 1 2 2 陆萍 , 凌冰 , 方风琴 , 季育华 1. 上海市血液 中心, 上海 20005 1; 2. 上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科, 上海 200025 摘 要: 为了评估 目前常用的去 白细胞滤器去除血液成分中人 巨细胞病毒( HCMV) 的效果, 我们在 献血员 中 筛选获得 HCMV-IgG、pp65 皆阴性的血液, 分离外周血单个核细胞( PBMC) , 将 HCMV 感染的人成纤维细胞 与 PBMC 共培养, 感染 HCMV 的 PBMC 经抗人成纤维抗体 和抗 CD45 磁珠 2 次分选 纯化后, 将 CD45 + 单核细胞 加回原全血 中, 建立 HCMV 潜伏感染的模型, 再用去 白细胞滤器过滤 。用实时聚合酶链反应( PCR) 定量测 定 过滤前、后血液样本 中的病毒载量, 残留成纤维细胞所含的 HCMV 通过定量反转录 PCR ( RT - PCR) 扩增脯- 4-羟化酶 exon12a mRNA 来校正。结果显示, 使用去 白细胞滤器后, 每单位( 200 ml) 全 血血液 中, 白细胞的去 除率为 99. 98% 。全血 中平均 HCMV 病毒载量从 3 742 拷 贝/ μl 降至 22. 57 拷 贝/ μl, 降低 2. 50 log10 , 说明去 白细胞滤器虽然可 明显减少全血 中 HCMV 病毒的载量, 但并不能完全去除病毒 。 关键词: 巨细胞病毒; 去 白细胞滤器; 成纤维细胞 Assessing the effect of removing human cytomegalovirus from blood components using quantitative polymerase chain reaction 1 1 2 2 LU Ping , LING Bing , FANG Feng-Qin , JI Yu-Hua 1. Shanghai Blood Center, Shanghai 200051, China; 2. Clinical Diagnostic Laboratory, Ruj in Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai 200025, China Abstract: The purpose of the current study is to assess the effect of removing human cytomegalovirus ( HCMV) by leukocyte reduction filtration ( LRF) in blood center. Peripheral blood mononuclear cells ( PBMCs) from blood samples negative for HCMV-IgG and pp65 were separated and co-cultured with HCMV-infected human fibroblasts in order to establish infection. The infected PBMCs were purified from fibroblasts by double selection using magnetic beads coated with anti-human fibroblast antibodies and anti-CD45 and then spiked into whole blood units prior to LRF. After LRF, HCMV load in whole blood and in fibroblasts was assessed using real-time quantitative polymerase chain rea