转化生长因子β在软骨组织工程中的研究进展 - 第三军医大学学报.docVIP

转化生长因子β在软骨组织工程中的研究进展 袁小洪、安荣泽、王兆杰、贾婀娜 【摘要】TGF-β能诱导软骨组织工程种子细胞向软骨分化，是目前基因强化软骨组织工程首选的生长因子基因。它有3种亚型：TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3。软骨组织工程种子细胞主要有：间充质干细胞、脂肪干细胞、软骨细胞。胎盘间充质干细胞是目前新发现的具有很好潜力的种子细胞来源。TGF-β诱导种子细胞的方式主要有两种：一种是外源性诱导，另一种是内源性诱导。通过基因转染技术和组织工程技术相结合的内源性诱导方法能解决外源性诱导的很多缺点，是目前软骨组织工程研究的热点。多基因联合转染的内源性诱导方法能更好的促进种子细胞向软骨细胞转化。然而要将TGF-β诱导的组织工程软骨广泛地应用于临床还有还需解决安全性、残存的免疫原性等问题。 【关键词】转化生长因子β；组织工程；间充质干细胞；基因转染 转化生长因子-β（TGF-β）基因是一种细胞生长和细胞外基质合成的多功能调节器，它的表达产物可以促进软骨细胞增殖，增加蛋白多糖和Ⅱ型胶原合成，在基质降解中抵抗分解代谢，抑制基质金属蛋白酶（MMP）的表达，是目前基因强化软骨组织工程首选的生长因子基因。目前运用TGF-β基因诱导具有多分化潜能的干细胞分化为软骨细胞的方法主要有两种：一种是外源性诱导，即应用含有TGF-β因子的细胞培养液对干细胞进行诱导培养；另一种是内源性诱导，即应用基因转染技术将TGF-β基因转入干细胞，使之大量表达所需的调控因子，有效促进干细胞向软骨细胞分化和软骨细胞外基质合成。本文概述了相关方面的研究进展。 1、TGF-β的概况 TGF-β是一族具有多种功能的蛋白多肽，分子量100-250KD，研究表明在生长板软骨细胞中，由LTBP(latent TGF-β binding protein)储存的TGF-β是细胞成熟依赖性的。根据在抑制内皮细胞、造血细胞的生长及间充质干细胞生成细胞外间质等方面所起作用的不同分为TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3。TGF-β1是一种多功能的细胞因子，抑制分化末期的软骨细胞分化并抑制软骨基质的钙化，抑制碱性磷酸酶活性。在软骨分化发育过程中，研究发现Sox9是调控软骨发生的主要转录因子, 它还能抑制发育中的软骨细胞发育成肥大的软骨细胞，Sox9和软骨细胞特异性基因Ⅱ型胶原共同表达,TGF-β1能正向调节软骨特异性基因Sox9和Ⅱ型胶原基因的表达，促进脂肪干细胞向软骨分化。Lin等将人ADSCs在含有TGF-β1和地塞米松等的培养基中进行培养，结果14天后发现软骨细胞特意表型Coll-Ⅱ和Sox9 mRNA高水平表达。TGF-β2的生物学功能与TGF-β1相似，对软骨和成骨分化具有调节作用[,]。有研究证实，用TGF-β2处理去分化的软骨细胞后，细胞重新表达葡萄胺聚糖和Ⅱ型胶原，恢复了其软骨表型；软骨膜中分离的前体细胞在含有TGF-β2和IGF-1的培养基中培养后产生软骨基质，表现出软骨分化的潜能6。TGF-β3也具有促进骨髓间质干细胞软骨分化的作用[,]，同时还有抑制炎症反应和促进金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase, TIMP)表达的作用。最近有报道认为TGF-β2和TGF-β3诱导MSCs向软骨分化的能力比TGF-β1强。 2、种子细胞的研究 种子细胞是体外构建组织工程组织、器官最为重要的材料，软骨组织工程更是以大量表型稳定的种子细胞为基础。目前研究较多的种子细胞主要有：间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)，属于成体干细胞，具有在特定的组织发育区聚集的能力，并最终发育形成某种特定的组织或器官[,,]，并在局部的趋化因子和细胞因子作用下迁移分化，最终完成组织的修复。MSCs来源丰富，主要有骨髓、脂肪、肌肉、胎盘、骨膜及软骨膜等，研究证明经一定条件培养，这些MSCs均能够转化为软骨细胞。骨髓间充质干细胞是目前研究最多的种子细胞之一，研究表明， 将离心微球化(pellet)的BMSC在含有TGF-β无血清培养液中培养，2周左右即可获得富含细胞外基质的软骨细胞，组织学检查可见软骨细胞样陷窝。脂肪干细胞与骨髓基质干细胞均属于来自中胚层的成体干细胞，研究证实两种干细胞的生物学特性及分化潜能相似，由于它取材更方便、来源充足、细胞增殖迅速稳定、提取时对机体损伤小，并已成功构建出了组织工程软骨，现已成为又一种理想的种子细胞来源。胎盘间充质干细胞是近年来新发现的从胎盘获取的一类干细胞，台湾研究人员从细胞表面抗原分析发现，胎盘间充质干细胞是介于胎盘干细胞和成体干细胞之间的新种干细胞,它不太可能被受体的免疫系统拒绝，又不涉及伦理问题，因此，它可以作为很好的干细胞来源。杜莉莉等从胎盘里分离获取了胎盘间充质干细