激光紫外可见光.ppt

德国Leica激光扫描共聚焦显微镜SP5 II简介 基本参数 型号：德国Leica SP5 II 激光器：4个 发射波长400nm-800nm 物镜：10倍 20倍 63倍 通道：多通道 多色 系统：windows 7＋LAS AF 活体细胞装置：配有 激光扫描共聚焦显微镜的基本特点 ?? 观察方式：以荧光为主 ?? 光源：激光（紫外、可见光） ?? 照明方式：点照明、逐点扫描 ?? 成像方式：共聚焦、逐点成像 ?? 输出：实时观测，数字化图像，可以进行 图像处理和定量分析 ?? 多重染色样品的观察 基本功能 基本功能 基本功能 三维重构成像 基本功能 激光扫描共聚焦显微镜的基本操作 双击电脑显示屏桌面上的“LAS AF”图标启动徕卡共聚焦软件。 通过显微镜前面板的按钮选择合适的荧光滤块，进行样品的荧光观察。 点击工具栏下方的“Configuration”，再点击“Laser”，用??打开所需激光。 选择的激光光源 (●开 ●关) 调节激光输出功率的滑块，选择所需激光及其功率（激光按抗体说明书选择，其功率一般20%-30%之间）。 在“Acquire”菜单栏的“Acquisition”中选择扫描模式(Acquisition Mode)。xyz 扫描是最常用的扫描模式，可用于平面及三维扫描。xyzt用于时间序列扫描。 在“Acquire”菜单栏的“Acquisition”中设置扫描参数，包括分辨率(format)、扫描速度(speed)、针孔大小(pinhole size)及放大倍数(zoom)等。（一般“live” 时分辨率为512x512,扫描速度为400HZ; “start” 时分辨率为1024x1024,扫描速度为200HZ，针孔大小为1-3） 。 图像文件的保存（save all）及输出（export）。 1. 保存已采集的图像。 2. 关闭LAS AF 软件。 3. 将电脑桌右侧“Laser Power”按钮右侧的激光开关钥匙(Laser Emission)逆时针旋转90 度至“On-0”位置。 4. 关闭电脑后，关闭“PC Microscope”按钮，关闭“Scanner Power”按钮。 5. 风扇停止后(关闭激光开关钥匙约5 分钟后)，关闭“Laser Power”按钮。记录关机时间、仪器状况等信息。 在生物医学中的主要应用 日常保养及注意事项 使用显微镜油镜后请用无水乙醇清洁镜头前部。 短时间的停顿工作时，无需关闭系统。 只是做一些分析图片等工作时，无需打开激光器控制钥匙，以减少激光器的损耗。 请避免使用外界存储设备（U盘，移动硬盘等），以免电脑受病毒感染。 请不要安装包含杀毒软件在内的任何未经软件生产商授权和经Leica工程师认可的软件。 样品要求 激光共聚焦适用的器皿及要求 Leica网上课程???????????? Leica Science Lab网址：?????? 激光扫描共聚焦显微镜 多荧光标记样品的高清晰度、高分辨率图像 采集 光学显微镜分辨率：0.25μm 共焦显微镜分辨率：0.18μm ?? 定位、定量分析 ?? 无损伤、连续光学切片，显微“CT” ??三维重构成像 ??活体细胞荧光染色的动态观察及快速扫描成像 开机 依次打开电脑桌右侧“PC Microscope”、“Scanner Power”及“Laser Power”三个圆形按钮，然后将“Laser Power”按钮右侧的激光开关钥匙（Laser Emission）顺时针旋转90 度至“On-1”位置。 系统自检完毕后，显示LAS AF 基本界面。 选择合适的物镜，通过显微镜主机右侧的物镜转换按钮。 选择发射波长范围（按抗体说明书）。 激活所需PMT，调节PMT 的gain 或offset 等。 点击“Live”以设定的扫描参数预览图像，图像将显示在右侧的显示屏上。单击”Start”进行图像采集。 关机 （一）原位鉴定细胞或组织内生物大分子、观察细胞及亚细胞形态结构 1.细胞原位检测核酸 2.原位检测蛋白质、抗体及其他分子 3.检测细胞凋亡 4.细胞器观察及测定 5.观察细胞骨架 6.检测细胞融合 7.检测细胞内脂肪 （二）活体细胞或组织功能的实时动态监测 1.细胞内离子动态变化的测量 2.膜电位的测量 3.细胞内PH值的测定 4.检测细胞内活性氧物种的产生 5.检测药物等跨膜进入组织或细胞过程及其定位 样品经荧光标记 组织切片在载玻片上，用盖玻片封片 固定的或活的贴壁培养细胞应培养在共聚焦专用 培养皿或盖玻片上 悬浮细胞，甩片或滴片后，用盖玻片封片 载玻片厚度应在0.8～1.2mm之间，盖玻片应光 洁