红豆杉中MYB家族基因克隆及表达分析-开题报告.pdfVIP

毕业设计/论文 开 题 报 告 课 题 名 称 红豆杉中MYB 家族基因克隆及表达分析 类 别 毕 业 论 文 系 别 城 市 建 设 学 院 专 业 班 生物工程0701班 姓 名 于 凯 评 分 指 导 教 师 华中科技大学武昌分校 华中科技大学武昌分校学生毕业论文开题报告 学 生 姓 名 于 凯 学 号 20071171005 专业班级 生物工程0701班 系 别 城市建设学院 指导教师 余龙江 职 称 教授 课 题 名 称 红豆杉中MYB 家族基因克隆及表达分析 1 课题研究的目的和意义 1.1 课题研究背景 1.1.1 有关红豆杉 红豆杉是一种濒临灭绝的天然抗癌植物，由于在自然条件下生长缓慢，再生能力差， 所以很长时间以来，世界范围内还没有形成大规摸的红豆杉原料林基地。中国已将其列 为一级珍稀濒危保护植物，联合国也明令禁止采伐。 红豆杉在全球共有十一种，目前我国共有四种和一个变种，即云南红豆杉、西藏红 豆杉、东北红豆杉、中国红豆杉和南方红豆杉 （变种）。东北红豆杉主要分布在分布于 中国的吉林、辽宁、黑龙江三省，中国境内的红豆杉中，东北红豆杉紫杉醇含量最高， [1] 可达万分之三 。云南红豆杉主要分布在滇西与地洲等地。西藏红豆杉主要分布在云南 西北部、西藏南部和西南部。南方红豆杉主要分布在滇东、滇西南、滇东。 曼地亚红豆杉是我国20世纪90年代中期从加拿大引种而来，原产于美国、加拿大， 是一种天然杂交品种，其母本为东北红豆杉，父本为欧洲红豆杉。引种的曼地亚红豆杉 生物特性稳定，没有发生变异，紫杉醇含量接近甚至高于原产地。我们的实验就是以曼 地亚红豆杉为材料的。 1.1.2 有关紫杉醇 紫杉醇(Taxo1)是2O世纪7O年代初从短叶红豆杉树皮中提取分离得到的一种四环 二萜酰胺类化合物，分子式为：C H NO ，是红豆杉属植物中的一种复杂的天然次生 47 51 14 [2] 代谢物，主要由紫杉烷环和侧链组成 ，其生物合成非常复杂，全过程约20步酶促反应， [3] 涉及多步环化、羟基化、酰基化反应 。 紫杉醇是一种微管特异性药物，它能够稳定微管并阻止微管解聚，使细胞分裂停 [4] 止于有丝分裂期，从而抑制细胞的增殖 。临床研究表明，紫杉具有广谱而高效的抗 癌活性，对于治疗卵巢癌、乳腺癌等疗效突出。但是由于含量少、提取困难等诸多因 素，高纯度紫杉醇价格昂贵，每公斤200万元人民币左右。因此，近年来国内外许研究 人员、实验室和公司一直试图通过生物合成、化学合成、微生物提取、组织和细胞培养、 寻找类似物等途径来解决紫杉醇的药源短缺问题。 研究紫杉醇的生物合成，尤其一些限速反应步骤机理的阐明对于人为定向的提高合 成效率，克隆重组形成关键酶基因从而提高紫杉醇的产量意义重大。从理论上来说这是 一个好方法，但是紫杉醇的合成途径非常复杂，涉及到多种酶以及很多分支途径，单纯 依靠转化一、两种限速酶基因，只能保证转入的限速酶表达量提高，使之不再是限速因 素，但其它阶段对于最终产量的限制依然存在，而且同时转入多种基因的可行性非常低， 这种方法的缺陷很明显。 若采用化学合成，如从红豆杉植物中分离得到的巴卡亭Ⅲ经过四步化学过程可合成 [5] 紫杉醇，为合成紫杉醇提供了新途径 。但化学合成从实质意义上说还没有取得彻底的 突破，目前还不具备应用价值。 如果从共生真菌中直接提取紫杉醇，能够利用真菌生长速度快的优势，但目前分离