第十六课高效液相色谱法.docVIP

第十六章 高效液相色谱法 教学内容 1. 液相色谱的组成和各系统的工作原理2. 液相色谱柱的分离原理3. 液相色谱的类型 二．重点与难点 1. 高效液相色谱与气相色谱的异同点2. 高效液相色谱速率理论方程式在实验条件优化中的应用3. 分离柱和流动相的选择和匹配4. 不同种类液相色谱分离的原理上的差异 三．教学要求 1. 掌握液相色谱分离的工作原理2. 了解液相色谱仪器各个系统的组成以及工作原理3. 熟练掌握液相色谱中的反向和正相色谱的分离原理和工作条件4. 了解各种液相色谱分离方法以及色谱柱的工作原理5. 掌握液相色谱分离分析中的定性和定量方法 四．学时安排 4 学时 第一节 概 述 高效液相色谱法是继气相色谱之后，70年代初期发展起来的一种以液体做流动相的新色谱技术。 高效液相色谱是在气相色谱和经典色谱的基础上发展起来的。现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率 和实现了自动化 操作。经典的液相色谱法，流动相在常压下输送，所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9(107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法。 二、液相色谱分离原理及分类 和气相色谱一样，液相色谱分离系统也由两相——固定相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。色谱分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶剂（即流动相或洗脱液）以及固定相分子间的作用，作用力的大小，决定色谱过程的保留行为。 根据分离机制不同，液相色谱可分为：液固吸附色谱、液液分配色谱、化合键合色谱、离子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。 三、液相色谱与气相色谱的比较 液相色谱所用基本概念：保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱一致。液相色谱所用基本理论：塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致。但由于在液相色谱中以液体代替气相色谱中的气体作为流动相，而液体和气体的性质不相同；此外，液相色谱所用的仪器设备和操作条件也与气相色谱不同，所以，液相色谱与气相色谱有一定差别，主要有以下几方面： （1）应用范围不同 气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难。致使其应用受到一定程度的限制，据统计只有大约20%的有机物能用气相色谱分析；而液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限制，它非常适合分子量较大、难气化、不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物及高聚物的分离分析，大约占有机物的70 ~ 80%。 （2）液相色谱能完成难度较高的分离工作 因为： 气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，不参与分配平衡过程， 与样品分子无亲和作用，样品分子只与固定相相互作用。而在液相 色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分子，为提高选择性增加了 一个因素。也可选用不同比例的两种或两种以上的液体作流动相， 增大分离的选择性。 液相色谱固定相类型多，如离子交换色谱和排阻色谱。等，作 为分析时选择余地大；而气相色谱并不可能的。 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般有利于色谱 分离条件的选择。 （3）由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，溶质在液相中的 传质速率慢，柱外效应就显得特别重要；而在气相色谱中，柱外区 域扩张可以忽略不计。 （4）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易，而且回收 是定量的，适合于大量制备。但液相色谱尚缺乏通用的检测器，仪 器比较复杂，价格昂贵。在实际应用中，这两种色谱技术是互相补 充的。 综上所述，高效液相色谱法具有高柱效、高选择性、分析速度快、灵敏度高、重复性好、应用范围广等优点。该法已成为现代分析技术的重要手段之一，目前在化学、化工、医药、生化、环保、农业等科学领域获得广泛的应用。 第二节 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪由 高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统 等五大部分组成（图14-2）。 分析前，选择适当的色谱柱和流动相，开泵，冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用微量注射