反向疫苗学在疫苗研制过程中作用.doc

反向疫苗学在疫苗研制过程中作用 杨骁 疫苗是控制传染病的最有效措施。传统疫苗（活苗、死苗、亚单位苗）在人畜疫病的防制上发挥着重大作用，对世界范围内唯一被消灭的天花．痘苗的发展及应用功不可没[1]。但传统疫苗研究存在以下限制：(1)部分病原微生物不能在体外或实验室条件下进行培养，如梅毒螺旋体和乙肝病毒等；(2)疫苗研发周期长，往往需要近10年的时间才能研制出一种安全的新产品；(3)不同血清型疫苗之间缺乏交叉保护性，无法抵抗异源病毒的侵袭；(4)不少疫苗存在免疫效果差、安全性不高及毒力变异等问题。目前，疫病的流行朝着突发性、高传播性、高致病性发展，这对传统的疫苗研究产生了极大冲击，我们迫切需要一种更加快捷、高效的疫苗研发途径[2]。 随着人类基因组测序的完成，生物科学从基因组学(Genomics)到蛋白质组学(Pro—teomics)的新的研究模式已经初步形成。疫苗研究也开始改变过去从表型分析人手的思维方式。而是从全基因水平来筛选具有保护性免疫反应的候选抗原[3]。这种以微生物基因组为平台，应用生物信息学技术预测毒力因子、分泌及表面相关抗原；应用蛋白质组学技术寻找外膜抗原；应用体内表达技术(in vivo expession，IVET)、信号标签诱变技术(signature mutagenesis，STM)、DNA芯片等寻找侵袭及毒力相关抗原。对上述抗原基因进行高通量克隆、表达、纯化重组蛋白。然后，再对纯化后的抗原进行体内、体外评价，筛选出保护性抗原，进行疫苗研究。这种以基因组为基础来筛选蛋白质抗原的疫苗发展策略，称为反向疫苗学（Reversevaccinology）。 相对于常规或传统的疫苗研究方法，反向疫苗学具有如下优势：第一：便捷，整个过程从分析基因组序列开始，不需要培养微生物；第二：宽泛，基于将所有的蛋自质看做是潜在的具有免疫原性的思路，整个过程从芯片法分析基因组序列开始，适用于所有微生物所有微生物疫苗的研究；第三： 安全，可以对一些危险的病原微生物进行操作，避免病原微生物的扩散；第四：病原在不同时期和环境表达的蛋白质抗原都会被分析用来作为候选抗原，即使在对微生物的致病机理和免疫应答了解不多的情况下也可运用[4]。 反向疫苗技术在1999年首次用于鉴定和筛选B型脑膜炎球菌(meningococcus B，MenB)的候选疫苗。Pizza等 对脑膜炎球菌进行了全基因组序列分析，并通过PCR技术从脑膜炎球菌中筛选出600个表面或膜相关蛋白质的基因，克隆至大肠杆菌中，成功表达出350种蛋白质，用蛋白印迹实验、荧光激活细胞分类器和ELISA、杀菌实验进行抗原定位、免疫原性和保护性测试，其中85种筛出物呈表面暴露，22种表达物能够诱导补体介导的抗体杀菌，因此具备对B型脑膜炎球菌的免疫保护力，说明经反向疫苗技术筛选的MenB抗原分子是有潜在价值的疫苗候选物[5]。 细菌的外膜蛋白最易与机体的免疫系统接触，因此能够诱导保护性免疫反应的蛋白质多是此类蛋白。但细胞膜是个动态的环境，其成分常随着外界环境和细胞周期的改变而变化。单一的基因组的数据库分析无法预测这些动态的变化， 而结合蛋白质组学的方法则可以分离鉴定菌体所有的蛋白，也可以研究比较不同环境下菌体分泌的蛋白质的差异，用于动态地研究各种蛋白质的功能[2]。检出与抗体有良好的结合能力，能刺激机体的免疫系统的蛋白质将成为候选疫苗成分。 大多数病毒的基因组较小，其全长基因组的获得较为容易。在过去几年里，人们已经对许多能引起人和动物的重大疾病的病毒的基因组进行了测定，对病毒各基因的功能和编码产物也有了一定的了解。在认识到某种病毒结构蛋白的抗原性(如包膜和核心蛋白)以后，可以使用基因工程菌大量制备免疫原，然后再纯化免疫原，最后用纯化的免疫原接种实验动物，结果能使动物产生类似于完整病毒粒子的免疫反应，并为动物提供保护[4]。丙型肝炎病毒是引起丙型病毒性肝炎的病原体，HCV是一个南脂膜包裹的正链RNA病毒，病毒包膜上整合有病毒编码的包膜蛋白E I和E2。由于HCV无法在体外培养和镜检观察其结构。所以用传统方法研制丙肝病毒疫苗遇到瓶颈。Reed KE等，分析了HCV包膜蛋白的全基因组序列，并使E1和E2在一些宿主内得到表达。这些重组蛋白能保护猩猩不受同源HCV的感染，这使用E1和E2研制疫苗获得了进展。 寄生虫的病原体比较庞大，抗原部位多且免疫原性分析起来比较复杂，在孢子体、裂殖体、生殖体各生活周期中表达不同抗原，使疫苗的研制非常困难[5]。疟疾是通过蚊叮咬传播的疟原虫病，每年都有500万人感染疟疾，其中有2．5万人死亡。尽管历经多年的研究，从疟原虫中鉴定了20多种抗原，但没有一种适合做疫苗。反向疫