子宫内膜癌PTEN突变的分析.pdfVIP

中文摘要 目 的 glEN是目前在子宫内膜癌中突变率最高的抑癌基因。本研 究应用聚合酶链反应一单链构象多态性方法(PCR—SSCP)检测 了31例子宫内膜癌组织及lO例正常子宫内膜中抑癌基因gFEN 外显子5、外显子8的突变情况，探讨子宫内膜癌PTEN基因突变 与临床病理特征的关系。 j l材料与方法 1．材料： 1．I标本来源 组织标本来自于2001年1月至2002年9月中国医科大学附 属第二医院的住院手术患者31例及门诊患者lO例，包括3l例子 宫内膜癌，10正常子宫内膜。每个病例均具有完整的临床病例资 料。全部病例在术前均未接受放疗、化疗及性激素类药物治疗。 3l例子宫内膜癌中，内膜样腺癌25例，腺角化癌1例，腺鳞癌2 例，透明细胞癌2例，浆液性腺癌1例。患者年龄35～69岁，平均 7例，Ⅲ期4例，Ⅳ期1例；G。20例，G28例，q3例。 1．2方法：常规提取DNA，PCR扩增：外显子5引物的DNA 为5’一CTCAGAllGCCTrATA ·】i 后1次循环结束后，于72℃继续延伸10min。 SSCP检测基因突变将PCR扩增产物与等量的变性缓冲液混 匀，97℃变性10rain后，冰上骤冷，取样101xL上样于6％中性聚乙 酰胺凝胶电泳，电压为150V。电泳时间6～8h，用硝酸银染色显示 条带。用正常组织DNA扩增产物的SSCP带型作为阴性对照，如 出现其他迁移率不同的带型则判断为有突变发生。 1．3 统计学方法：采用X2检验和四格表确切概率法，用 SPSSl 1．5软件进行数据处理。 结 果 子宫内膜癌组31例中PTEN突变发生10例，突变率为32． 2％，正常子宫内膜组lO例中无l例发生PTEN突变，P0．05，二 者差别有统计学意义。20例G1级有9例发生PTEN突变、11例 9．1％，P0．05。25例子宫内膜样腺癌中PTEN突变9例，突变率 为36．o％。其他类型6例，PTEN突变1例，突变率16．7％，二者 无统计学差异，P0．05。I、Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ期PIEN突变率分别为 33．3％、28．3％和20．o％，各组间无统计学差异。但突变发生率 有递减趋势。肌层浸润1／2、≥I／2的PTEN突变率分别为37． 5％和14．3％，各组间无统计学差异，P0．05。但突变发生率有 递减趋势。外显子5、8的突变率均为16．1％，各自发生于不同的 病例中。未发现同时出现外显子5、8突变的情况。外显子5与外 显子8在组织学类型、临床分期、病理分级及肌层浸润深度方面均 无显著性差异。 ·2· 讨 论 1997年Li等…在染色体10q23．3处分离得到一种新的基因， 命名为与细胞骨架蛋白tensin同源在肿瘤的10号染色体有缺失 and onchromo— Tensin deleted 的磷酸酯酶基因(Phosphatehomolog some ten，PTEN)。该基因具有9个外显子，编码由403个氨基酸 组成的细胞质蛋白。PTEN通过对细胞周期的调控、影响细胞凋 亡以及细胞粘附、迁移等发挥抑癌作用。PTEN具有肌醇3磷酸 酶活性，能催化第二信使磷脂酰肌醇三磷酸PIP3和1，3，4，5四磷 酸肌醇[Ins(1，3，4，5)]Ins3位脱磷酸。PTEN影响基因的表达， 对细胞生长具有负性调节作用。 此外，PTEN还直接使局部粘附激酶(FAK)及ShC脱磷酸，影 响细胞迁移、浸润、整合素介导的细胞铺展及局部粘附的形成。 PTEN基因的失活主要通过等位基因缺失、基因突变、甲基化、mR— NA或蛋白表达降低或不表达等方式完成。PTEN基因突变或缺 失导致磷酸酶活性丧失，使细胞发生恶性转化。 本研究显示，31例子宫内膜癌中，有10例发生PT