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- | 2002-02-19 颁布
- | 2002-05-01 实施
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GBT18637—2002牛病毒性腹泻粘膜病诊断技术
GB/T 18637--2002
前 台
牛病毒性腹泻/粘膜病(bovineviraldiarrhea/mucosaldiseaseBVD/MD)是由牛病毒性腹泻病毒
(BVDV玛}起的牛的 一种以粘膜发炎、糜烂、坏死和腹泻为特征的疾病
应用微量血清中和试验检查BVD/MD抗体,具有其特殊意义,它不仅可以定性,而且还可以定量,
并从抗体量的动态变化中,可以判定病牛是以前感染过本病,还是现在正在感染过程中,从而为防治本
病提供科学依据
本标准的附录A、附录B、附录c都是标准的附录
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:中国兽药监察所、农业部动物检疫所。
本标准主要起草人:邵振华、郑志刚
中华人民共和国国家标准
GB/T 18637--2002
牛病毒性腹泻/粘膜病诊断技术
Diagnostic techniques for bovine viral diarrhea /mucosal disease
范围
本标准规定了牛病毒性腹泻/粘膜病(BVD/MD)的诊断技术要求。
本标准适用于BVD/MD的流行病学调查和检疫。
2 定义
本标准采用下列定义。
细胞玻片
放置在莱顿氏(Lei沙tons)管或其他用作培养细胞的小瓶中,长有单层细胞的盖玻片。
3 BVD/MD病毒分离与鉴定
3.1材料准备
3.1.1阳性参照毒株为牛粘膜病病毒俄勒冈毒株(Oregon C,, V) o
3.1.2 BVD/MD荧光抗体(BVD/MD-FA)、阳性血清。
3.1.3荧光显微镜:采用蓝紫光为激发光的透射式或落射式荧光显微镜
3.1.4 犊牛(或胎牛)血清:无BVD/MD抗体和无污染。
3.1.5 细胞培养瓶扁瓶、Leighton s管、0. 17 mm厚度的盖玻片(1. 0 cm X 3. 8 cm或0.8cmx
2. 4 cm), 0. 8 mm- 1. 0 mm厚的普通玻璃载片,带盖湿盒。
3.1.6 溶液配制:pH 7. 0^-7. 2 0. 01 mol/1,磷酸盐缓冲液,pH9. 0^-9. 5 0. 5 mol/I碳酸缓冲甘油〔见
附录A(标准的附录)〕
31.7细胞培养液:见附录B(标准的附录)。
3.1.8原代细胞培养物:见附录C(标准的附录)。
3.2病毒分离
3.2.1样品的采集
32.1.1对于牛群、种公牛的检疫,无菌采血液或精液。
对怀疑为急性感染期或持续感染的牛,采血或鼻分泌物。
对流产、死胎,采胎儿的组织。
对怀疑为死于粘膜病的牛,可采集血块和各组织,尤其是肠道集合淋巴组织。如果肠道样品已
发生白溶,可采扁桃体或淋巴结。
3.2.2样品处理
血液用常规方法分离血清。
3.2-2.2凝血块:冻融数次后,取析出的上清液(加人适量的双抗即青链霉素)。
组织样品用含1 000 IU/m工双抗的细胞培养液作1:10倍的乳剂,离心取上清液
中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2002-02-19批准 2002 - 05 - 01实施
标准分享网 免费下载
Gr/s 18637--2002
3.2-2.4 精液冻融3次(或超声波裂解处理),用细胞培养液作1:10倍稀释,离心取上清液
32.2.5 鼻分泌物:用含1000IU(mg)/mL双抗,)的培养液4倍稀释后,离心取上清液。
以上各样品处理后均需作无菌检验
3.2.3 样品的接种培养
将10ml牛辜丸原代细胞(见附录C)接种于小扁瓶,置37C静止培养。培养到细胞形成80Y
以上单层。
取出中小扁瓶,倒去培养液,接种~的样品,每瓶接种样品1mL.
每份样品接种3瓶。
3.2-3.3 置37(、吸附2h-3ho
3.2-3.4 吸附后,将样品倒去,加维持液[见附录B中BI,另加3%犊牛血清(3.1.4)]10m工置37C恒
温培养
32.3.5 培养6d后,将其冻融3次,收集3瓶细胞及其培养基,混合后即为样品分离细胞培养物
3.3 样品分离物的病毒鉴定
3.3.1
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