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第一章 光谱技术 作 者: 王 英 联系电话: 第二节 光谱分析的基本原理 一、光的基本性质 * 许多物质有颜色,大量无色的物质可以与显色剂作用生成有色的物质，这些有色的化合物颜色的深浅与其浓度成正相关，则浓度越大，颜色越深。故通过测定颜色的深浅可对物质进行定量分析，称为比色分析法。 一、比色分析的概况： 最早的纳氏比色法是按浓度从低到高，配好系列标准管，然后将待测样品与标准管进行比较定量，如黄疸指数的测定，它属于目力比色法。这种方法很简单，但误差很大。 第一节 概 述 后来造出光电比色计，其原理是一束平行单色光通过一定厚度的有色溶液时，一部分光被吸收，未被吸收的光透过溶液照到光电池上，光电池将光能转换成电能，推动检流计偏转，再和标准管比较可计算出待测溶液的浓度。 但光电比色计只适合在有限波长内测量，不能满足不同分析工作的需要。 为了克服以上不足制造了性能更好的分光光度计，分光光度计将分析区域扩展到红外和紫外波段。这样许多用普通比色法无法进行分析的无色物质，只要在红外或紫外区域内有适当的吸收峰，便可以用相应的分光光度计加以测定。从而大大扩展了物质的测定范围，尤其是在有机化合物检测方面的应用。 分光光度计分吸收光谱仪和发射光谱仪两类。 发射光谱仪主要有光栅光谱仪、荧光分光光度计和火焰光度计，可见及紫外分光光度计、红外分光光度计等为吸收光谱仪。 根据物质具有吸收、发射或散射光谱谱系的特征，来测定其性质、结构或含量的一类分析技术称为光谱分析技术。 光谱分析技术包括吸收光谱分析、发射光谱分析和散射光谱分析三大类。 它具有灵敏、快速、准确、简便等优点，是一种最常用的生化分析技术。 常用的有：可见及紫外分光光度法、红外分光光度法、荧光法，原子吸收光谱法、火焰光度法及比浊法等。 二、光谱分析技术 光是一种电磁波，是能的一种表现形式，是一种以巨大速度通过空间传播的光量子流，在不同的介质可发生反射、折射、衍射、色散和偏振等现象。 光是电，电是光，光电可相互转换。 光具有波动性，以波动的形式进行传播，并可用波长、频率、传播速度等参数来描述。 两个波峰之间的距离为波长（?），单位时间内通过某一点波的数目为频率（?）, c为光速。 波长与频率之间的关系是： 不同波长的光具有不同的能量，光的能量与光的波长成反比，波长越长（频率越低），能量越小；波长越短（频率越高），则能量越大。紫外光的波长小于可见光和红外光的波长，因此，紫外光的能量大于可见光和红外光的能量。 二、光谱 光谱是复合光经色散后的单色光按一定顺序排成一幅光的色谱。 光谱又可分为发射光谱、吸收光谱和散射光谱。 1. 发射光谱 发光体通过三棱镜或光栅的色散后得到的光谱，为发射光谱，不同的发光体（光源）有其独特的发射光谱。 2. 吸收光谱 物质的原子或分子对光选择性地吸收而得到的光谱，为吸收光谱。 （1） 对固体物质来说，当白光照射到物质上时，物质对于不同波长的光吸收、透过、反射、折射的程度不同而使物质呈现不同的颜色。 对各种波长的光完全吸收则呈现黑色；完全反射则呈现白色；吸收程度差不多则呈现灰色。 如果只吸收了部分波长的光，这种物质则呈现出反射光的颜色。 （2） 对溶液来说，溶液呈现不同的颜色，是由于溶液中的分子或离子选择性地吸收某种颜色的光所引起的。 如果各种光透过程度相同，这种溶液是无色透明的。 若只让一部分波长的光透过，其它波长的光被吸收，这溶液则呈现出透过光的颜色，是它吸收光的互补颜色。 表1-1列出了物质颜色与吸收光颜色之间的关系。 如将表1-1中相对应的光按一定的比例混合，可以成为白光，因此，这两种光称为互补色光。 任何一种溶液，对不同波长的光的吸收程度是不相等的。如果将各种波长的单色光依次通过一定浓度的某一溶液，测量该溶液对各种单色光的吸收程度，以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标，可以得到一条曲线，即吸收光谱曲线。 表1-1 物质的颜色和吸收光颜色的关系 物质的颜色 吸收光 颜色 波长（nm） 黄、绿 紫 400~450 黄 蓝 450~480 橙 青、蓝 480