植物氰丙氨酸合成酶分析.pdfVIP

前言与致谢 二年的博士后生活即将结束，在此首先衷心感谢合作导师李德葆教授在工作、 学习和生活等诸多方面的谆谆教诲和悉心关照。李老师的平易近人、治学严谨、学 识渊博而仍忘我工作给我留下了深刻印象，并将值得我学习终生。此外，所在的浙 江大学生物技术研究所和中心实验室的诸多老师，如周雪平教授、臧荣春教授、郭 泽建教授、陈卫良副教授、胡东维副教授、马志超副研究员、娄沂春老师、毛碧增 老师，等等．都曾提供许多中肯的建议和无私的帮助，在此也一并致以诚挚的谢意I 生物技术所和中心实验室是一支团结合作的队伍，有着浓厚的学术氛围和良好的精 神风貌，这一切都让我受益非浅。 氰丙氨酸合成酶是植物解氰作用的关键酶，由于其底物氰化物可抑制线粒体呼 吸电子传递，而植物产氰又是一种普遍现象，因此氰丙氨酸合成酶的功能和植物细 胞的物质和能量代谢均有着直接的关系，所以也是植物体完成各种生理乃至病理功 能的基础。本文所述主要是在植物氰丙氨酸合成酶的生理生化方面所取得的一些初 步却很有意义的结果。生理生化背景是研究病理的基础，有关氰丙氨酸合成酶和植 物抗病的相关性及其机理将在下一步进行研究。 为了研究的高起点，有关工作其实是从烟草氰丙氨酸合成酶的分离纯化开始 的，旨在通过获得该酶的氨基酸序列而进一步在国内外首先获取该酶的基因序列， 因此在酶蛋白的分离纯化上曾花费了相当多的时间与相当大的精力，包括摸索各种 层析固定相和洗脱条件。以期每一步都获得最好的纯化效率和最高的活性得率。 本文的研究获得国家自然科学基会和中国博士后科学基金的资助。 4 文中有关简写或缩略语 AA： A Antimycin ACC： acid 1-Aminocyclopropane-·1·-carboxylic AOX： Alternative oxidase AP： Alternative pathway AsA： Ascorbicacid BSA： Bovifieserulllalbumin CAS： 0·cyanoalaninesynthase CBB： Coomassiebrilliantblue Chi： Chloroplast Cys： L-Cysteine DMPDA：N．N—dimethyl-p—phenylenediamine DTT： Dithiothreit01 DW： Dryweight EDl、A： diaminetetraaceticacid Ethylene FW： Fresh weight kD： Kilodalton Mit： Mitochondria PAGE： Polyacrylamidegelelectrophoresis RelativeWater RWC： content SAR： resistance Systemicacquired SHAM： acid Salicylhydroxamic TCAC： acid Tricarboxyliccycle TMV： mosaicvirus Tobacco Tri