天草杂柑胚乳培养研究初报.pdfVIP

浙 江 柑 橘 2008年 第25卷 第4期 天草杂柑胚乳培养研究初报 聂振朋 柯甫志 李 丽 罗君琴 温明霞 (浙江省柑橘研究所 台州 318020) 柑橘胚乳的离体培养是获得三倍体无籽柑橘的重要途径 [J]，关于柑橘胚乳再生植株诱导 的培养时有报道，研究表明柑橘胚乳培养存在愈伤组织诱导率较低，愈伤组织分化不定芽困难 等现状 【1,2 。本文针对这一现状以天草杂柑为对象进行研究，以期找到提高柑橘胚乳再生植 株诱导率的新途径，提高柑橘胚乳培养成功率。 1材料与方法 1．1 试验材料 胚乳培养的材料取 自浙江省柑橘研究所品种园，以授粉三个月左右的天草杂 柑幼果为材料。 1．2 材料的消毒及愈伤组织诱导 在 1～4℃条件下处理天草杂柑幼果， 然后分批消毒接 种。消毒接种前，用 自来水冲洗天草杂柑幼果30min左右，以冲去表面的杂物，在超净工作台 上剥离出种子，用0．1％HgC12消毒6～7min，无菌水冲洗4～5次，每次3～5min。在无 菌条件下，于种子的合点端纵剖一刀，以打开种子取出胚囊。在胚囊的胚端轻轻挤压，挤出幼 胚后，剥离出胚乳，单独接种。所用培养基以MS为基本培养基，采用正交设计，正交设计的 因素及水平分别为6-BA浓度 (O．5、1．0、1．5mg／L)，2，D浓度 (0．2．0．4、0．6mg／L)， 每个处理接种 10瓶。培养基pH5L8～6．2，琼脂7．，L，蔗糖40g／L，活性炭浓度 1．0mg／L，在 25℃，光照时间为 14h，强度为20001x的条件下诱导愈伤组织并及时对其进行形态观察，60d (天)后统计结果，计算出愈率 (出愈率=愈伤组织块数 ／接种个数)。 1-3 器官分化和不定芽诱导 将获得的天草杂柑胚乳愈伤组织进行继代增殖培养后，接种于 器官分化和不定芽的诱导培养基。以MS培养基为基本培养基，添加物采用两因素 (6-BA、 活性炭)三水平 (6-BA 0．5mg／L、 1．0mg／L、 1．5mg／L；活性炭 1．0mg／L、2．0mg／L、 3．0mg／L)随机区组设计，重复3次，每处理每次接种2O块愈伤组织，不定时观察愈伤组织动 态变化，60d后统计不定芽发生情况。 2 结果与分析 2．1 愈伤组织诱导 胚乳接种培养20d左右，开始膨大，在切 口及附近表面长出乳白色 (有 的略带淡黄色)愈伤组织。愈伤组织结构紧凑，表面有颗粒状突起。不发生愈伤组织的胚乳逐 渐干瘪，颜色变白，最后死亡。 2．1．1低温处理对胚乳愈伤组织诱导的影响。从表 1的结果可以看出，处理时间在8d(天)内 效果不明显；处理 lid和 14d，显著提高胚乳愈伤组织诱导率，分别达到 14．9％和 18．1％；当 处理时间延长为17d时，胚乳发生愈伤组织的能力下降，说明天草杂柑胚乳培养时低温预处理 时间以14d为宜。 收稿 日期：2008—09．02 2008年 第25卷 第4期 浙 江 柑 桶 ·3 · 胚乳接种块数 形成愈伤组织块数 愈伤组织诱导率 处 处 处 处 处 处 处 处 处 处 处 处 处 处 处 培养基 理 理 理 理 理 理 理 理 理 理 理 理 理 理 理 l 2 3 4 5 l 2 3 4 5 1 2 3 4 5 注：A代表2,4一DAI、AzA3分别代表，2，4一D的3个水平0．2mgL／、0．4mg／L、0．6mg／L；B代表6-BA，B1、B2、B3 分别代表6-t~A的3个水平0．5mgL／、1．0mgL／、1．5mgL／；C代表活性炭，活性炭浓度为 1．0mg／L；~JE1～处理5分别 代表不同的低温处理时间 (5d、8d、lid、14d、17d) 2．1．2 不同激素种类及配比对愈伤组织诱导的影响。由表2可以看出，6-BA浓度对愈伤组织 诱导的影响呈抛物线状：6一BA浓度为0．5mg／L时出愈率较低为10％；6-BA浓度为1．0mg／L时 出愈率最高，可达