半定量RT-PCR检测运动发酵单胞菌中外源基因转录水平的.PDFVIP

微生物学通报 JUN 20, 2009, 36(6): 831~836 Microbiology © 2009 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 半定量 RT-PCR 检测运动发酵单胞菌中外源 基因转录水平的研究 1,2 1,2 1,2* 1,2 1,2 1,2 1,2,3 马媛媛 邹少兰 张 鲲 洪解放 井 欣 刘 成 张敏华 (1. 300072) (2. 300072) (3. 300072) 摘 要: 本研究运用半定量RT-PCR 法检测运动发酵单胞菌重组菌中外源基因xylB 的转录水平。 提取野生型运动发酵单胞菌CP4 及其2 个重组菌的总RNA, 检测无DNA 污染后定量至同一浓度、 并反转录为cDNA 。观测目的基因xylB 和内标基因 16S rRNA 的PCR 扩增曲线、并确定合适的循 环数, 选用相同量的cDNA 为模板, PCR 检测各样本中xylB 相对 16S rRNA 的转录水平。结果表 明野生型菌株CP4 中xylB 基因没有转录, 而两株重组菌中皆有xylB 的转录本, 且转录丰度基本一 致, 酶活测定也进一步证实该基因在重组菌中有效表达。该方法可用于鉴定运动发酵单胞菌中特 定基因的转录水平, 是一种快速有效的检测方法。 关键词: 运动发酵单胞菌, 半定量RT-PCR, 基因表达 Research on Exogenous Gene mRNA Levels in Zymomonas mobilis by Semi-quantitative RT-PCR MA Yuan-Yuan1,2 ZOU Shao-Lan1,2 ZHANG Kun1,2* HONG Jie-Fang1,2 JING Xin1,2 LIU Cheng1,2 ZHANG Min-Hua1,2,3 (1. Tianjin University RD Center for Petrochemical Technology, Tianjin University, Tianjin 300072, China) (2. Key Laboratory for Green Chemical Technology of Ministry of Education, Tianjin University, Tianjin 300072, China) (3. State Key Laboratory of Engine, Tianjin University, Tianjin 300072, China) Abstract: An effective RT-PCR method was developed to detect exogenous gene xylB transcript levels in Zymomonas mobilis CP4. Total RNAs without genomic DNA contamination were purified from wild-type and gene engineering