一种简捷有效的大肠杆菌感受态细胞制备方法.pdfVIP

安徽农业科学。JournalofAnhuiAgri．Sci．2008，36(29】：12627—12628 责任编辑 罗芸 责任校对 李洪 一 种简捷有效的大肠杆菌感受态细胞制备方法 代红星 ，张庆桥 ，樊宝良 (1．河北农业大学动物科技学院，河北保定071000；2．河北工程大学农学院，河北邯郸056038) 摘要 [目的]探索建立简捷快速有效的大肠杆菌感受态细胞制备方法。[方法]在 已有的TSS法基础上进行 了进一步的改进 ，建立了 一 个只需一步室温离心便能够获得与常规方法效价相近，能够长期保存的大肠杆菌感受态细胞的制备方法。[结果]新方法制备的感受 态细胞每微克转化菌落教达 10～10。个，可以满足在质粒中进行的常规克隆需要。不同冻存时间对新方法制备的感受态细胞转化效率 无显著影响。新方法制备的感受态细胞可以立即使用也可以于一8O℃下长期保存至少9个月不会影响其转化效价。这也与常规CaC1 法制备的感受态细胞性能相 当。[结论]该方法为一次大量制备并长期保存使用感受态细胞奠定了基础。 关键词 大肠杆菌；感受态细胞 ；CaC1，法；制备 中图分类号 S182 文献标识码 A 文章编号 05l7—66l1(2008)29—12627—02 A SimpleandEffectiveM ethodforPreparationofEscherichiacoliCompetentCells DAIHong-xingetal (CollegeofAnimalScienceandTechnology，HebeiAgriculturalUniversity，Baoding，Hebei071000) Abstract O『bjective1Theaimwastoexplorethesimpleandeffectivemethodof preparationofEscherichiacolicompetentcells．[Method] A methodforpreparationofE．colicompetentcellswasconstructedbythefurtherimprovementonthebasisoftheknownTSSmethod，which neededonlvonestepofcentrifugationatroom temperaturetoobtaintheE．colicompetentcellspreservedinalongtimeandhadthesimilaref- flciencvastheroutinemethod． 『Result]Thenumberofpertxgcolonytransofrmedbythecompetentcellspreparedbythenewmethodreached 10 ～10 ．whichcouldmeetthedemandofroutineclonecompletedintheplasmid．Difierentcryopreservationtimehadnosignificantinfluenee onthetransformati0nefficiencyofthecompetentcellspreparedbythenewmethod．andtheceilscouldbeusedimmediatelyandalsocouldbe preservedinalongtimeat一80oC ．whosetransformationefficiencycouldnotbeinfluencedatleast9monthsanditsperformancewasequiva- 1enttothatDreparedbvtheroutineCaCI，method． C『onclusion]Themethod1aidtheofundationforlargescalepreparationofcompetentcells in onetime，andpreservationandusageofcompetentceilsin alongtime． Keywords Escherichiacol：Competentcell：CaC1method；Preparation 分子生物学实验中，DNA重组技术和外源基因的表达是 TSS法基础上进行了进一步的改进 ，建立了一种更为简捷有 最为常用的研究手段之一。而体外构建的DNA重组子必须 效的