一种鉴定小鼠胚胎质量的双重荧光染色方法.pdfVIP

动物学报 54(5)：928—932，2o08 cⅡ．D gcnSncr上 一 种鉴定小鼠胚胎质量的双重荧光染色方法* 芦天罡 郭 勇 倪和民 刘云海 北京农学院动物科学技术系，北京 1O2206 摘 要 尝试改进并建立一种较可靠的、适合小 鼠胚胎质量参考鉴定的双重荧光染色 (细胞计数)方法。 与传 统方法相比，本实验 中抗羊脾细胞抗血清的最佳稀释度为 1：5，作用时间为 3Omin。豚鼠补体最佳稀释度为 1：5 ， 两种分染染料 H33342和 PI的工作浓度均降低至5．3 g，rnl便可着色，染色时间延长至90min，加大了染料工作液 中柠檬酸钠的浓度，并在计数观察前增加压片这一步骤。染色过程 中应注意避免血清物质对抗体补体的不 良影 响以及避光和快速 的操作 。双重荧光染色后小 鼠胚胎 内细胞团 (IcM)细胞着色为蓝色，滋养层 (|rE)细胞着色 为粉红色，数 目清晰可辨 。此方法可 以作为一种简洁有效 的小 鼠胚胎质量鉴别参考方法 [动物学报 54 (5)： 928—932，20O8]。 关键词 小 鼠 囊胚 双重荧光染色． Anemcientimmun0nu0rescenced0uble-staiIlingassayf0ridentify- ingthequality0fm0useblast0cysts LU Tian—Gang，GU0 Y0ng，NIHe—Min，LIU Yun—Hai“ DepartmentofAnimalScienceandTechnol0gy，BeingUniversityofAgriculture，Being 1O2206，China Abstract Thestudyexaminedanimpr0vedimmun0Ⅱu0rescenced0uble—stainingassyf0ridentifyingthequ iyofm0use b1ast0cysts．0urmethod0Iogyincludedthef0ll0wingimpmvements：theb|astocystsweretreatedwithanti—sheepwh0lesemm wi血 1／5diluti0nf0r3Omin，and[hentreatedwithGuineap c0mp1ementarysenlmcontainingwih【5．3 g／mlpr()pidiumiodideand bisbenzimide，with l／5 dilution f0r90min．C0ncentrations0fs0dium citratewerela1s0 increased．Squashingmustbe initiated befbrecountingembryoniccellnumbers．Thepotentiallynegativeef ctofsemm on ant-bodyandcomplement，light—tightstatus andrapid0perationmustbetakenint0acc0unt．FoU0wingdouh1e—staining，meinnerceUmass(1CM)ceUswerec0loredb】ue，but thetmphect0deHn(TE)oneswerepink，andthesetw0ceUtypesc0uldbeclearlydistinguished．Weconcludethatthisimpf0ved double—stainingassaycanbeusedtoassessthequaliyofm0useblastocystsmoreconciselyande{bcientlylc￡0—．ooZ0 c 5 o 54(5)：928—932，2OO8]． KeywOrds Mouse，B1astocyst，Immun0nu0rescenced0ub1e—staining 随着动物胚胎生物技术的不断拓展和深入，无 放射性 同位素标记法和荧光染色法 四种 (孙兴参 论是体外生产胚胎 、