溃结汤对大鼠溃疡性结肠炎治疗作用及肠粘膜MMP-9影响的分析.pdfVIP

中文摘要 溃结汤对大鼠溃疡性结肠炎治疗作用及 肠粘膜MMP．9影响的研究 摘 要 目的：溃疡性结肠炎(UC)的病因及发病机制目前 尚不完全清楚，但是和UC相关的细胞及分子水平的机理 研究已经有了很大进展。许多证据表明细胞因子在UC的 发生和发展中起重要作用。各种肠道炎症动物模型研究显 示，抑制前炎症细胞因子可以缓解肠道炎症。 基质金属蛋白酶(matrix 细胞外基质降解过程中必不可少的酶，因而在胚胎发育、 组织重塑、肿瘤侵袭、伤口愈合、炎症、血管形成等各种 生理病理过程中发挥关键作用。大部分MMP在转录水平 受各种细胞因子和生长因子的调节。MMP以前体或酶原 形式分泌，进而在细胞外或血管基底膜外被蛋白酶水解激 活。它们的活化受上述因素和特异性组织金属蛋白酶抑制 剂(TIMP)以及非特异性抑制剂如啦．巨球蛋白调控。在 正常稳定状态组织中MMP表达量极少，但在受到前炎症 细胞因子，如白介素OL)．1和肿瘤坏死因予(TRY)．c【等刺 激时，导致MMP生成过多，MMP／TIMP比例失调，促使 细胞外基质过度降解，出现降解／合成失衡，从而引发组 织结构破坏和，或组织重塑，进而功能受损。 UC的病理组织学特征是连续或不连续的炎症粘膜溃 疡和纤维组织增生。最近研究表明组织基质降解同样发生 在UC粘膜。应用免疫组化检测发现MMP．3和MMP．9 中文摘要 nj‘以促进白细 在UC粘膜破坏区表达增高，而且MMP-9 胞和血浆蛋白的局部浸润。 日前，国内未见MMP在UC发炳·f·作川|(I勺相火灾验 或临床研究报道。本实验旨在探讨UC人鼠肠粘膜MMP-9 的表达以及本科自拟。}l药浈结汤(KJT)对J￡影响和对UC 的治疗作用。 方法：1．UC动物模型的建立：取50只健康成年Wistar 大鼠(体重270±209，雌雄各半)，成．H=J复合法(2，4一二 硝基氯苯+乙酸)制备细胞免疫反应性UC大鼠模型。 2．动物分组及处理：取已造模成功Wistar大鼠40只， 随机均分为模型组、KJT低剂量组、KJT高剂量组、SASP 组，并设正常对照组Wistar大鼠10只。KJT低剂量组和 KJT高剂量组分别以KJT生药109／kg、209／kg煎成汤剂 灌胃，SASP组以SASP 0．29／kg用蒸馏水制成悬液灌胃， 模型组及正常对照组给予等量生理盐水灌胃。各组大鼠均 灌胃2周并观察大鼠临床表现，然后以10％水合氯醛 (350mg／kg体重)腹腔注射麻醉，剖取距肛门2-10cm结 肠，共8cm沿肠系膜缘剪开肠腔，用生理盐水清沈干净， 称量结肠重量，而后平展于8倍放大镜下，进行肉眼观察 和形态学分析，然后，用已消毒锋利刀片切取5x10mm大 小的结肠组织(模型组包括部分结肠溃疡创面在内)，浸 泡于4％多聚甲醛，用于lqE及免疫组化染色。另外，切 取3x3 mm大小的结肠组织(模型组包括部分结肠溃疡创 面在内)，浸泡于2％(pH7．2．7．4)戊二醛中固定，嚣于4。C 冰箱．用于SEM样品制备。 3．观察指标：(1)结肠重量(2)大体形态粘膜损伤 中文摘要 程度评分；(2)HE染色病理观察；(3)扫捕【|=I镜(SEM) 肠粘膜损伤观察：(4)MMP．9免疫纰化染色，图像分析 系统处理。 结果：1．火鼠的…般情况、结肠组织人体脱察、结肠 重量和肠粘膜损伤程度评分：(1)。‘般情况：50只造模 大鼠于造模起1．2周，相继出现局部皮肤炎症损害及结痂， 大鼠毛色失去光泽，精神倦怠甚至萎靡，活动及进食明娃 减少，体重下降等变化。造模完成后5．10人，所有造棋 大鼠开始腹泻，其肛周污秽、粪便恶臭，并出现粘液脓血 便或粪便稀溏等UC常见症状，可持续12．16周。jE常组 无上述变化。(2)结肠组织大体观察：正常组肠粘膜光滑， 无水肿、出血、溃疡、肠壁增厚等表现。模型组可见肠粘 膜充血、水肿、糜烂、坏死、肠壁增厚、溃疡形成。KLT 低剂量组、KJT高剂量组及SASP组在用药两刷后上述变 化均较模型组减轻。(3)结肠重量(g)：对照组1．74±