２株污染小球藻的除菌技术.pdfVIP

第３卷第４期 水 生 态 学 杂志 　Ｖｏｌ．３，Ｎｏ．４ ２０１０年　７月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｙｄｒｏｅｃｏｌｏｇｙ 　Ｊｕｌ．，２０１０ ２株污染小球藻的除菌技术 王海英，裴国凤，杨　柳 （中南民族大学微生物与生物转化重点实验室，湖北 武汉　４３００７４） 摘要：在考察普通小球藻（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａｖｕｌｇａｒｉｓ）和蛋白核小球藻（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａｐｙｒｅｎｏｉｄｏｓａ）对青霉素、硫酸链霉素和制霉 菌素等３种抗生素敏感性的基础上，研究了几种对已污染藻种除菌的方法。结果表明，２株小球藻对抗生素的敏 感性有明显差异；青霉素、硫酸链霉素与制霉菌素的单独使用与联合使用对藻生长的影响差异不明显；液体培养 基中加入组合抗生素能够暂时抑制藻液中杂菌的生长，但并不能得到纯培养藻种；离心清洗与抗生素结合使用能 够大量除掉细菌，却使霉菌旺盛生长，说明藻菌间存在复杂的相互关系；使用添加合适浓度的混合抗生素的固体 平板连续分离２次最终得到了藻的纯培养物。 关键词：小球藻；藻种纯化；抗生素 中图分类号：Ｑ９４９．２１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１６７４－３０７５（２０１０）０４－０１４６－０４ 　　近年来，藻类学研究发展很快，虽然从自然界采 １　材料与方法 集和鉴定的藻种类很多，但对于藻类生理、生化和分 子遗传学等研究来说，需要纯培养的藻种。由于采 １．１　藻种来源及培养方法 用常规分离方法往往无法获得某些藻类的纯培养 藻种分别为普通小球藻（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａｖｕｌｇａｒｉｓ）和 物，藻种纯化工作难以进行（汪本凡等，２００７），在已 蛋白核小球藻（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａｐｙｒｅｎｏｉｄｏｓａ），在培养过程 鉴定的上万株微藻中，只有很小的一部分获得了纯 中发现其生长不良，培养液中出现絮凝沉淀的现象。 培养藻种，无法获得一些藻的无菌纯藻种已成为制 藻种培养基为 Ｂａｓａｌ培养基，灭菌后备用。培 约藻类学研究的重要因素之一（甘旭华等，２００５）； 养温度为（２８±１）℃，光照度为３０００１ｘ，光暗比Ｌ 另外，尽管一些藻的无菌纯藻种已经获得，但在实验 ∶Ｄ＝１２ｈ∶１２ｈ。在藻种传代及培养过程中，均严 室操作和工业放大过程中很容易被污染，生产当中 格遵循无菌操作规则。 保持藻种的稳定比较困难，因此微藻无菌化技术的 １．２　微藻培养液中带菌的检测 研究具有重要的现实意义。微藻无菌化的技术可以 细菌检测培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，真菌 分为物理方法和化学方法，由于藻和细菌对抗生素 检测培养基为马铃薯真菌培养基，涂布微藻培养液 的敏感性有一定差异，可以利用抗生素除去与藻共 ０．１ｍＬ于平板上，２８℃培养２～４ｄ，观察培养结果。 存或污染的细菌（赵培等， ２００７）。本实验考察了２ １．３　小球藻对抗生素敏感性的测定 株小球藻对所选取的抗生素的敏感性，对在培养过 选用青霉素、硫酸链霉素、制霉菌素检测小球藻 程中污染的２株小球藻用多种无菌化处理方法进行 对抗生素的敏感性，首先将抗生素配成母液，用无菌 的分离，对除菌中应注意的问题进行了初步探讨，为 水配制成所需浓度，过滤后保存。将青霉素、硫酸链 小球藻扩大培养过程中出现的细菌和真菌污染的去 霉素、制霉菌素分别按浓度梯度加入各为５０ｍＬ的 除提供实验基础。 接近对数生长期的待除菌微藻培养液内（表 １），培 养８ｄ，以未加抗生素的微藻为对照，实验设３个平