贵州石笔木DNA提取与ISSR-PCR反应体系的建立.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2008，36(29)：12607—12610 责任编辑 李菲菲 责任校对 傅真治 贵kltI石笔木 DNA提取与 ISSR—PCR反应体系的建立 赵杨 ，王秀荣l*，何可权 ，唐荣华 (1．贵州大学林学院，贵州贵阳55o225；2．贵州省独山县林场，贵州独山558200) 摘要 [目的]利用ISSR技术对贵州石笔木的遗传多样性进行分析。[方法]以贵州石笔木种子、新鲜叶片和干燥叶片为试材 ，采用改良 的cTAB法和SDS法提取贵州石笔木基因组DNA，并对提取DNA的浓度和纯度进行测定。通过单因子梯度试验，筛选出优化、稳定的 ISSR—PCR反应体系。[结果]利用CTAB法和SDS法从石笔木叶片中提取DNA时，鲜叶和干燥叶片提取的DNA质量和浓度略有差别， CTAB法提取的浓度稍大而蛋 白残留稍 多，SDS法提取的DNA量稍少但质量最高。而从种子 中提取的DNA无论质量还是浓度均较差， 但 尚可满足 ISSR分子标记试验。贵州石笔木的适宜ISSR—PCR反应体系为2 的10×Buffer，模板DNA40ng，dN1’PO．25mmol／L，Taq 酶1U，引物0．2~moL／L，总体积为2O l。[结论]该ISSR技术体系适用于贵州石笔木遗传多样性分析。 关键词 贵州石笔木 ；DNA提取；ISSR反应体系 中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 o517—6611(2008)29—12607—04 EstabiishmentofDNA ExtractionandISSR—PCR ReactingSystem ofTutcheriakweichowensis ZHA0Yangetal (CollegeofForestry，GuizhouUniversity，Guiyang，Guizhou550225) Abstract 『0biectivelnleresearchaimedtolaytheofundationforthegeneticdiversityanalysisofTutcheriakweichowensisbyISSRtechnolo— gv．M『ethod]Thematerialsofthefreshleaves．dryleavesandseedsofTutcheriakweiehowensisandtheimprovedmethodsofSDSandCTAB wereusedfortheDNA extractionexperiment，andtheconcentrationandpurityoftheextractedDNA weredetermined．Throughsingle—factor gradienttest．theoptimizedISSR—PCRreactionsystemwasscreenedout．R『esult1WhenextractingthelearDNAofTutcheriakweichowensis withthemethodsofCTAB andSDS，thereweresmalldifferencesinqualityanddensitybetweenthefreshleavesanddry leaves．Therewere higherdensityandmoreproteinresiduesbyCTABthan thosebySDS．ThequantityofDNAwithSDSwasalittlelesst}lanthatofCTAB but withthehighestquality．BoththequalityanddensityofDNA extractedfron seedswereworse．butstil1qualifiedforISSRmolecularmarking experiment．rheappropriateISSR—PCRreactingconditionswereasfollows：20ulreactingsystem，10xBuffer，1U TaqDNA enzyme，0．2 mo1／Lprimer，0．25mmoL／LLdNTPand4OngtemplateDNA．1ConclusionII1hisISSRreactionsystemwassuitableofr血egeneticdiversity analysisofTutcheriakweichowensis． Keywords Tutche