鸡新城疫病毒F基因部分片段克隆表达及其抗体制备.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sei．2008，36(29)：12616—12618 责任编辑 王淼 责任校对 马君叶 鸡新城疫病毒 F基因部分片段克隆表达及其抗体制备 程宝艳，余为一，彭明义，程帮照，戴银，陈芳芳 (安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥230036) 摘要 [目的]为进一步研究新城疫病毒的分子结构和基 因疫苗奠定基础。[方法]用自行设计的l对引物，通过RT—PCR从接毒的SPF 鸡胚的尿囊液 中克隆了新域疫病毒F基因部分片段 ，将该基因片段插入含谷胱甘肽(GST)基 因的质粒pGEX·4T一1，构建 了重组质粒 ，对 提取的融合蛋 白进行亲和层析纯化和琼扩、ELISA及Western—blot检测。[结果]通过克隆和PCR扩增获得新城疫病毒F基因的部分片 段，大小为509bp；对构建的重组质粒pGEX一4T一1一F509经诱导表达，获得分子大小约为44000bp的融合蛋白，其中F基因的部分片段大 小约18000bp；经亲和层析，获得纯化GST—F5o9融合蛋白，进一步用该蛋白免疫小鼠，制备了鼠源抗鸡新城疫病毒F蛋白抗体。[结论] 琼脂扩散试验、ELISA及Western．blot检测表明，该融合蛋白中的F片段具有良好的抗原性。 关键词 新城疫病毒；F基因；克隆；原核表达 中图分类号 $858．31 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2008)29—126l6一O3 CloningandExpression ofPartialF GeneSegementinChickenNewcastleDiseaseVirusandItsAntibodyPreparation CHENG Bao-yanetal (CollegeofAnimalScienceandTechnology，AnhniAgriculturalUniversity，Hefei，Anhui230036) Abstract lObjectiveIrheresearchaimedtolaytheofundationforfurtherstudyonthemolecularstructureandgenevaccineofNewcastle diseasevirus． M『ethodIUsingonepairofself-madeprimers，partialFgenesegmentinNewcastlediseaseviruswasclonedfromallantoicnu． idinSPF chickenembryoafterinoculatingtheviur sthroughRT—PCR．ThisgenesegmentwasinsertedintoplasmidpGEX一4T一1withglutathi— one(GST)genetoconstructtherecombinantplasmid．Theextractedfusionproteinwaspurifiedbyaffinitychromatographyanddetectedby agardiflusiontest，ELISAandWestern—blot． 『ResultlPartialsegmentofFgeneinNewcastlediseaseviurswasobtainedthroughcloningand PCRamplification．withthelengthof509bp．TheinducedexpressionwasmadeontheconstructedrecombinantplasmidpGEX一4T．1一F509． thefusionproteinwiththemolecularsizeot44000bpwasobtained，amongthem thepartialsegmentsizeinFgenewas18000bp．Through affinitychromatography．thepurifiedGST—F509fusionproteinwasobtained．Thefusionproteinwasfurtherusedtoimmunizemicetoprepare miceFproteinantibodyagainstNewcastlediseasevirusinchicken．fConclusion1Agardiflusiontest，ELISAandWestern．blotdetection showedthatF segmentinthi