四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡的作用.pdf

㈣帆帆帆呲吣帅嗵眦磐 Y2337333 目 录 中文摘要………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………4 研究论文四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响 前言……………………………………………………………………………………．7日lj吾……………………………………………………………………………………………．．7 材料与方法………………………………………………………………8 结果……………………………………………………………………………………………．14 7 附图……………………………………………………………………．．1 附表……………………………………………………………………．．20 讨论……………………………………………………………………………………………．22 结论……………………………………………………………………．．27 参考文献………………………………………………………………．．28 l 综述中药复方影响心肌细胞凋亡的研究现状……………………………3 致谢…………………………………………………………………………．．37 个人简历……………………………………………………………………．．38 中文摘要 四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响 摘 要 目的：研究四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧损伤后原代培养乳鼠心 肌细胞的影响，探讨四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧损伤后原代培养乳 鼠心肌细胞凋亡的影响。 方法：本研究应用醇沉技术制备四妙勇安汤合生脉饮的药液，采用胰 蛋白酶和胶原酶联合消化的方法分离SD乳鼠心肌细胞，采取两次差速贴 壁法对心肌细胞进行纯化，原代培养，建立细胞模型，倒置相差显微镜下 观察原代培养的心肌细胞，不同时间下对细胞形态拍照并录像，利用免疫 细胞化学方法对心肌细胞进行纯度鉴定。利用高纯氮气建立心肌细胞缺氧 ／复氧模型，制备细胞缺氧用的密闭方盒，自制缺氧盒有进气口和出气口， 先用注射器自出气口尽量抽真空，再自进气口向缺氧盒中充高纯氮气 30—40min，置换盒中的氧气，关闭缺氧盒的进气口与出气口，缺氧时间 4h，复氧时间2h。原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为三组。正常对照组 (control group)：不进行缺氧／复氧的处理，不更换培养液，也不加四妙 勇安汤合生脉饮的醇沉药液进行干预；模型组(model group)：进行缺氧 ／复氧的处理，更换无糖无血清培养液，但不加四妙勇安汤合生脉饮的醇 沉药液；药物干预组(treatment group)：进行缺氧／复氧的处理，更换无 糖无血清培养液，加四妙勇安汤合生脉饮的醇沉药液进行干预。实验开始 时正常对照组更换完全培养基入培养箱培养6h；模型组、药物干预组更 换无糖无血清培养液，缺氧培养4h，随后模型组更换完全培养基，药物 干预组更换含有10％四妙勇安汤合生脉饮醇沉药液的完全培养基，复氧 2h，根据不同实验目的用于实验。采用MTT比色法检测心肌细胞存活力， 采用全自动生化自动仪检测心肌细胞培养液AST的含量，采用流式细胞 术AnnexinV-FITC／PI双染法检测心肌细胞凋亡率，比较各组心肌细胞存 活力、AST含量、心肌细胞凋亡率的情况，从而得出四妙勇安汤合生脉 饮对心肌细胞凋亡的影响结果。 结果：(1、)原代培养的乳鼠心肌细胞在倒置相差显微镜下观察，接种时 心肌呈悬浮状态，最早在6小时内观察到心肌细胞贴