沉默Ku86基因对Hela细胞放射敏感性影响简介.PDFVIP

·１００８ · 中华放射肿瘤学杂志２０１６年９月第２５卷第９期　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｒａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１６，Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．９ ·物理 ·生物 ·技术 · 沉默Ｋｕ８６基因对 Ｈｅｌａ细胞放射敏感性影响 何科　 瞿虎　 徐丽南　 牛刚　 费慧　 姜红叶　 梁炎春　 李婷婷　 尧冰 ５１００８０ 广州，中山大学附属第一医院妇产科（何科、牛刚、费慧、姜红叶、梁炎春）； ５１０６５５ 广州，中山大学附属第六医院生殖中心（瞿虎、徐丽南、李婷婷、尧冰） 通信作者：瞿虎 ＤＯＩ：１０．３７６０／ ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００４⁃４２２１．２０１６．０９．０２４ 　 　 【摘要】　 目的　 探讨ｓｉＲＮＡ沉默Ｋｕ８６基因表达对宫颈癌Ｈｅｌａ细胞放射敏感性的影响。方法 Ｘ射线照射后采用ｑＲＴ⁃ＰＣＲ、蛋白印迹法检测Ｋｕ８６基因在Ｈｅｌａ细胞中的表达水平，利用ｓｉＲＮＡ沉默 Ｋｕ８６基因表达。 将ｓｉ⁃ＮＣ、ｓｉ⁃ＫＵ８６转染到宫颈癌Ｈｅｌａ细胞中，０、２、４、６、８、１０ ＧｙＸ射线照射。 ＣＣＫ⁃８ 试剂盒检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，克隆形成实验分析转染前后细胞放射敏感 性变化，检测ｐ５３、Ｃａｓｐａｓｅ⁃８表达分析沉默Ｋｕ８６基因表达对放射诱导的细胞凋亡影响。 结果　 Ｘ线 照射后Ｋｕ８６ｍＲＮＡ和蛋白表达水平上调，沉默Ｋｕ８６表达降低了Ｈｅｌａ细胞的增殖能力和克隆形成能 力，放射增敏比为１５７。 沉默Ｋｕ８６表达上调了ｐ５３和Ｃａｓｐａｓｅ⁃８表达，细胞凋亡增加。 结论　 ｓｉＲＮＡ 沉默Ｋｕ８６表达提高了宫颈癌Ｈｅｌａ细胞的放射敏感性。 【关键词】　 ＲＮＡ干扰；　 Ｋｕ８６基因；　 宫颈癌细胞系；　 放射敏感性 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｋｕ８６ ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ ｏｎ ｔｈｅ ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｈｅｌａ ｃｅｌｌｓ 　 Ｈｅ Ｋｅ，ＱｕＨｕ，Ｘｕ Ｌｉｎａｎ，Ｎｉｕ Ｇａｎｇ， Ｆｅｉ ｈｕｉ，Ｊｉａｎｇ Ｈｏｎｇｙｅ，Ｌｉａｎｇ Ｙａｎｃｈｕｎ，Ｌｉ Ｔｉｎｇｔｉｎｇ，Ｙａｏ Ｂｉｎｇ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ ａｎｄ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｕｎ Ｙａｔ⁃ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１００８０，Ｃｈｉｎａ （Ｈｅ Ｋ，Ｎｉｕ Ｇ，Ｆｅｉ Ｈ，Ｊｉａｎｇ ＨＹ，Ｌｉａｎｇ ＹＣＨ）；Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ Ｃｅｎｔｅ，Ｓｉｘｔｈ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｕｎ Ｙａｔ⁃ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６６５，Ｃｈｉｎａ （ＱｕＨ，ＸｕＬＮ，Ｌｉ ＴＴ，Ｙａｏ Ｂ） Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＱｕＨｕ 　 　 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｉＲＮＡ⁃ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｋｕ８６ ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ ｏｎ ｔｈｅ ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｈｅｌａ ｃｅｌｌｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ　 Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ＰＣＲ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ Ｋｕ８６ｇｅｎｅｉｎＨｅｌａｃｅｌｌｓｅｘｐｏｓｅｄｔｏＸ⁃ｒａｙｒａｄｉａｔｉｏｎ．ｓｉＲＮＡｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ Ｋｕ８６ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ．Ａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｓｉ⁃ＮＣｏｒ ｓｉ⁃ＫＵ８６，Ｈｅｌａｃｅｌｌｓｗｅｒｅｅｘｐｏｓｅｄｔｏ０，２，４，６， ８，ａｎｄ １０ Ｇｙ ｏｆ Ｘ⁃ｒａｙ． Ｔｈｅ ＣＣＫ⁃８ ｋｉｔ，ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ａｎｄ ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ａｎｄ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ ａｎｄ ｃａｓｐａｓｅ⁃８ｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｔｏ ａｎａｌｙｚｅｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｋｕ８６ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ ｏｎｒａｄｉａｔｉｏｎ⁃ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ