蛋白质纯化系统aktapurifier.pdf

蛋白质纯化系统AKTApurifier 牛血清白蛋白（BSA）的脱盐实验 • 层析原理 • 层析系统 • 实验目的及原理 • 实验流程 层析原理 －－根据生物分子与填料的相互作用原理不同分成五个类型 Gel Filtration Ion Hydrophobic Reversed 分子筛 Exchange 离 interaction phase Affinity 亲和 子交换 疏水层析 反相 O S O O 分子筛 1. Spherical particles packed into a column. 2. Sample applied. 3. Buffer (mobile phase) and sample 4. Large molecules leave the column first move through column. Molecules diffuse followed by smaller molecules in order of in and out of matrix size. Molecules larger than the matrix pores pass straight through. Diffusion Diffusion out of the pores Buffer Buffer Diffusion into the pores 根据分子的大小不同来分离的，大分子由于进入不到填料孔径内，走的路 径短所以先从层析柱中流出来，小分子相反。 不同填料有特定的分离范围 1k 10k 100k 1000k 离子交换层析（IEX） • 离子交换层析是一种吸附层析,根据带电荷的分子和 层析填料上相反电荷之间可逆的相互作用进行分离. • 离子交换层析是基于分子之间电荷的差异进行分离. 带电荷的表面 •生物大分子如蛋白质的表面是带有电荷的 •净电荷是