山羊精原干细胞的分离纯化及鉴定 - 畜牧兽医学报.pdfVIP

畜牧兽医学报 ， （ ）： １５５４１５６０ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 ： ／ ｄｏｉ１０．１１８４３ ．ｉｓｓｎ．０３６６６９６４．２０１３．１０．００７ ｊ 山羊精原干细胞的分离纯化及鉴定 孔群芳，罗奋华，萨初拉，包佳婧，刘代艳，吴应积 （内蒙古大学 哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室，呼和浩特 ０１００２１） 摘 要：旨在探究 种简便高效分离纯化山羊精原干细胞的方法。采用三步酶消化对 月龄的山羊睾丸进行处 １ ４ 　 理，分离获得单细胞悬液。将细胞依次培养于明胶、大鼠鼠尾胶原和层粘连蛋白涂层的细胞培养皿中，根据各类细 胞贴壁能力和贴壁速度不同进行精原干细胞的富集和纯化，并在各步纯化过程中用精原干细胞特异标记分子 和 进行免疫荧光标记染色鉴定，统计精原干细胞所占的比率，并对获得的细胞进行初步培养和鉴定。 ＰＬＺＦ ＣＤＨ１ 每克睾丸中分离出 ７个细胞。纯化后每克睾丸组织获得 ４个细胞，其中精原干细胞纯度达 。 １．３６×１０ ８．７×１０ ８７．０％ 将分离纯化后的细胞在体外培养可形成细胞簇，并表达精原干细胞标记分子 和 。结果表明，通过三步 ＣＤＨ１ ＰＬＺＦ 酶消化和差异贴壁方法已经建立起山羊精原干细胞的分离纯化技术。用此技术纯化的山羊精原干细胞（ ）能 ＳＳＣｓ 在体外培养增殖，形成细胞簇。 关键词：山羊；睾丸；精原干细胞；分离纯化；免疫荧光染色 中图分类号： ； 文献标志码： 文章编号： （ ） Ｓ８２７Ｑ２８ Ａ ０３６６６９６４２０１３１０１５５４０７ 　　　　 　　　　 犈狀狉犻犮犺犿犲狀狋犪狀犱犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犛犲狉犿犪狋狅狅狀犻犪犾犛狋犲犿犆犲犾犾狊犳狉狅犿犌狅犪狋犜犲狊狋犻狊 狆 犵  ， ， ， ， ， ＫＯＮＧＱｕｎｆａｎ ＬＵＯＦｅｎｈｕａＷＵＳａｃｈｕｌａＢＡＯＪｉａｉｎ ＬＩＵＤａｉａｎ ＷＵＹｉｎｉ ｇ ｊｇ ｙ ｇｊ （ ， 犜犺犲犓犲犔犪犫狅狉犪狋狅狉 狅狉犕犪犿犿犪犾犻犪狀犚犲狉狅犱狌犮狋犻狏犲犅犻狅犾狅 犪狀犱犅犻狅狋犲犮犺狀狅犾狅 犕犻狀犻狊狋狉狅 狔 狔犳 狆 犵狔 犵狔 狔犳 ， ， ， ） 犈犱狌犮犪狋犻狅狀犐狀狀犲狉犕狅狀狅犾犻犪犝狀犻狏犲狉狊犻狋 犎狅犺犺狅