利用无标记的分子信标及核酸染料sybr green i 检测乙肝病毒.pdfVIP

中国科学: 化学 2014 年 第44 卷 第12 期: 1996 ~ 2003 《中国科学》杂志社 SCIENTIA SINICA Chimica SCIENCE CHINA PRESS 论 文 利用无标记的分子信标及核酸染料SYBR Green I 检测乙肝病毒 * 向东山, 史伯安, 翟琨, 王联芝 生物资源保护与利用湖北省重点实验室, 湖北民族学院化学与环境工程学院, 恩施 445000 *通讯作者, E-mail: zk3100@ 收稿日期: 2014-02-26; 接受日期: 2014-04-30; 网络版发表日期: 2014-09-23 doi: 10.1360/N032014-00065 摘要 本文以野生型的乙型肝炎病毒(HBV)核酸片段为研究对象, 利用无标记的分子信标 关键词 及核酸染料SYBR Green I, 建立了一种高灵敏、高选择性的特定序列核酸检测方法. 在优化 无标记分子信标 11 11 SYBR Green I 条件下, 目标DNA 浓度为4 × 10 400 × 10 mol/L 之间时, SYBR Green I 的荧光强度(I) 乙肝病毒 与目标DNA 的浓度(C)具有良好的线性关系, 其拟合的回归方程为I = 1.9556 C + 31.4659 荧光 (R2 = 0.9956), 方法检测限(3)为2 × 1011 mol/L. 该方法操作简单、检测速度快、灵敏度高、 重现性好、检出限低. 利用该方法, 结合不对称PCR 技术, 实现了对HBV 的定量检测. 1 引言 毒分离法特异性强, 假阳性少, 但检测周期长, 且对 实验室要求较高, 不适合临床常规检查. 免疫学检测 病毒是由核酸分子(DNA 或RNA)与蛋白质构成 方法主要对血清中的抗原或者抗体进行检测, 这种 的非细胞形态的微生物[1, 2]. 很多常见的疾病如艾滋 方法是目前临床上应用较多的方法, 但在病毒感染 病、病毒性肝炎、流行性感冒、狂犬病、流行性乙型 初期不能检测, 存在一个较长的病毒感染“窗口期”. 脑炎、腮腺炎、脊髓灰质炎等都是由病毒引起的. 病 病毒核酸检测法是对病毒核酸或经过扩增后的病毒 毒在医学微生物中占有十分重要的地位, 在微生物 核酸片段进行检测. 这种方法能显著缩短病毒感染 引起的疾病中, 由病毒引起的约占75%. 病毒感染性 的“窗口期”, 可以做到早发现, 早预防, 降低感染几 疾病传染性强, 传播速度快, 传播途径广, 并发症复 率. 因此病毒核酸检测法在病毒检测中具有很好的 杂, 后遗症严重, 死亡率高, 诊治困难[3]. 近年来, 很 发展前景. 多病毒感染性疾病如艾滋病、病毒性肝炎、流行性感 当前, 利用病毒核酸法对 HBV 进行定量分析的 冒等在我国有逐年增加的趋势, 因此病毒的检测对 方法主要是实时荧光定量 PCR 法. 这种方法主要包 常见重大疾病的早期诊断与治疗具有十分重要的意 括非特异性的DNA 结合染料法和特异性探针荧光实 义[4]. 肝癌是危害人类健康的恶性肿瘤之一, 乙型肝 时定量 PCR 法[9~13]. 这两类方法在对病毒进行定量 炎病毒(HBV)感染是肝癌发病的主要原因, 肝癌发 分析时都有各自的优缺点