具有ace抑制活性的霞水母酶解肽制备条件优化 - 生物通.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３４（３）：１０３１０８ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 具有ＡＣＥ抑制活性的霞水母酶解肽制备条件优化 １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ ３ 贾梦蛟 　刘　睿 　陆杰霖 　朱蕴菡 　王令充 　王欣之 　吴　皓 　鲁明明 （１南京中医药大学药学院　南京　２１００２３２江苏省海洋药用生物资源研究与开发重点实验室　南京　２１００２３） （３江苏南星药物有限责任公司　南京　２１００２３） 摘要　目的：采用胰蛋白酶制备霞水母ＡＣＥ抑制肽，并以响应面法优化酶解肽制备工艺，通过超滤 分离获得具有ＡＣＥ抑制作用的酶解肽活性部位。方法：单因素实验以ＡＣＥ抑制率为指标，考察温 度、酶解时间、ｐＨ、加酶量，进一步通过响应面法优化酶解工艺，以不同截留分子量的纤维膜进行分 离。结果：胰蛋白酶水解霞水母制备ＡＣＥ抑制肽的最佳工艺条件为：酶解温度：４９．６℃，加酶量为 ０．６９％，ｐＨ为７．８，酶解时间２．０ｈ，酶解产物的平均ＡＣＥ抑制率为５６．７９％，与预测值５７．２０％的相 对误差为０．４１％，经过超滤分离获得分子量 ＜１ｋＤａ的酶解产物，ＡＣＥ抑制活性最高，其 ＩＣ 为 ５０ ６６．５８ｇ／ｍｌ。结论：确定霞水母酶解肽的制备工艺，其中分子量＜１ｋＤａ的部分为主要效应物质基础。 μ 关键词　霞水母　ＡＣＥ抑制肽　响应面　超滤　酶解工艺 中图分类号　Ｑ８１５ 　　霞水母（Ｃｙａｎｅａ）为属名统称，隶属于腔肠动物门 阴。现代临床用该汤治疗高血压，具有良好的效果。 （Ｃｏｅｌｅｎｔｅｒａｔａ）、刺胞亚门（Ｃｏｅｌｅｎｔｅｒａｔａ），钵水母纲 　　血管紧张素转化酶抑制药是目前常用抗高血压药 （ＣｌａｓｓＳｃｙｐｈｏｍｅｄｕｓａｅ）、旗口水母目（Ｓｅｍａｅｏｓｔｏｍｅａｅ）、 之一，对肾型高血压和原发性高血压均有显著疗效，同 霞水母科（Ｃｙａｎｅｉｄａｅ），是一种广布性的大型水母，广泛 时对缺血心肌和肾脏具有保护作用。其作用的对象血 ［１］ 分布于我国沿海 。目前国内外关于霞水母的研究主 管紧张素转换酶（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅ，ＡＣＥ）， 要集中在霞水母的形态结构、生长规律、渔业生态学及 ２＋ 是一个含有Ｚｎ 的金属肽酶，是血管紧张素转换酶催 ［２４］ 对海洋渔业资源的危害等方面 。 ［８］ 化反应的活性基团所在部位 ，能催化血管紧张素 Ⅰ 　　现代关于霞水母药用价值的研究表明，其水母毒 转化生成血管紧张素 。ＡＣＥ抑制肽可以通过与ＡＣＥ Ⅱ 素具有溶血活性、心脏毒性、肌肉毒性、神经毒性等作 ２＋ ２＋ 活性部位的Ｚｎ 结合，使 Ｚｎ 结合位点的性质受到 用［５６］。然而，除去微量毒素成分外，霞水母所含丰富 ＡＣＥ抑制肽的影响而发生改变，从而导致酶活性降低 的胶原蛋白一直以来仅以初加工食品为主，并未得到