测量抗原-标记抗体复合物的放射性 - 安徽医科大学基础医学院.ppt

第六章 体外分析 【目的要求】 了解体外分析技术的定义、种类、发展和共同特点。 了解放射免疫分析技术的发展； 掌握放射免疫分析的原理、未知样品的测量。 了解放射免疫分析技术的试剂要求；掌握放免技术的分类方法。 了解放免分析质量控制的分类、目的；质量控制的指标及意义。 了解免疫放射分析的原理；掌握免疫放射分析的方法及与放射免疫分析的异同；了解免疫放射分析的特点 【教学内容】 体外分析技术 定义、分类、发展和共同特点。 放射免疫分析 建立和发展；在临床中的地位 原理：标准曲线、未知样品的测量 各试剂的要求和配制；分离方法的要求、种类 放射免疫分析的质量控制：目的、分类、指标和意义 免疫放射分析 原理、方法 与放射免疫分析法的异同 免疫放射分析的特点及临床应用 定义 以放射性核素或其他非放射性物质标记的配体(Ligand)为示踪剂，以配体和结合体的结合反应为基础，在试管内进行的微量生物活性物质的检测技术。 放射分析方法或其派生的相关技术。 在体外进行机体内物质种类和含量的分析测定。 测定对象是患者血清或其他体液样品内的激素、其它生物活性物质和药物浓度等。 发展 1956年Berson和他的同事们偶然地观察到131I标记的胰岛素与胰岛素抗体的结合与体系中存在的非标记胰岛素的量呈一定的相关关系，而建立了放射免疫分析法 ，对医学的发展起到了划时代的推动作用，于1977年获得诺贝尔医学奖 。 几乎是在同一时期，Ekins和Murphy建立了竞争性蛋白结合分析方法，测定甲状腺素（T4 ）和皮质激素。 商品化试剂盒的应用。 多种体外分析技术的互相渗透。例如将酶免疫分析技术与荧光技术或化学发光技术结合，建立的荧光酶免疫分析及化学发光酶免疫分析，可极大地提高灵敏度，增大检测范围。 检测自动化。 实现多个待测物同时检测，如时间分辨荧光免疫分析。 使体外分析技术在临床和基础医学研究上应用极为广泛。 如内分泌学、肿瘤学、免疫学、病毒学、药理学、血液学、消化病学、神经病学、妇产科学等被推广应用，有力地推动了医学科学的发展。 体外分析技术建立的基础: 以配体和结合体的特异性结合反应为共同的生物学基础 以结合反应动力学规律作为共同的方法学基础 以放射性等的测量技术作为共同的定量手段 生物学基础：特异性结合反应 配体-结合体 抗原-抗体的免疫结合反应； 配基-受体的结合反应； 底物-催化酶之间的酶促反应； 　　 激素-激素结合球蛋白的结合反应。 方法学基础：结合反应动力学规律 遵守可逆反应的质量作用定律： k1, v1 [L]+[R] [RL] k2, v2 定量手段 (标记配体作为示踪剂) 放射性测量技术 酶定量技术 化学发光定量技术 荧光定量技术 发展 1956年Berson和他的同事们偶然地观察到131I标记的胰岛素与胰岛素抗体的结合与体系中存在的非标记胰岛素的量呈一定的相关关系，而建立了放射免疫分析法，对医学的发展起到了划时代的推动作用，于1977年获得诺贝尔医学奖。 几乎是在同一时期，Ekins和Murphy用自然存在在血液里的激素结合球蛋白（hormone-binding globulins）建立了竞争性蛋白结合分析方法(competitive protein binding assays, CPBA)，测定甲状腺素(T4)和皮质激素。 近年来的主要优势包括多种技术的互相渗透，自动化程度的提高等。例如将酶免疫分析技术与荧光技术或化学发光技术结合，建立的荧光酶免疫分析及化学发光酶免疫分析，可极大地提高灵敏度，增大检测范围。 在时间分辨荧光免疫分析( TRFIA)等分析法中应用新技术实现多个待测物同时检测。 放射免疫分析 radioimmunoassay, RIA 放射免疫分析法是Yalow和Berson于1960年在研究胰岛素的时候创立的一种体外放射分析技术。 结合了放射性核素的高灵敏度和抗原抗体反应的高特异性。 一、RIA的基本原理 （一）竞争抑制结合反应： 放射免疫分析是在体外条件下，由足量的非标记抗原（Ag）与定量的标记抗原（*Ag）对限量的特异性抗体（Ab）的竞争抑制结合反应。 基本原理 （二）剂量反应曲线：标准曲线 标记物与被测物之间的函数关系可以用剂量反应曲线来表示。剂量反应曲线是用一系列标准抗原反应而绘制出来的，所以又叫标准曲线。 标准抗原(标准品)是厂家在试剂盒中提供的已知剂量的非标记抗原。 标准曲线的绘制方法 用一系