出芽酵母saccharomyces cerevisiae 转录抑制因子rdr1 负调控细胞 .pdf

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2009, 36(12): 1544~ 1552 芽酵母Saccharomyces cerevisiae 转录抑制因子 Rdr1 负调控细胞胁迫应答* 苗敏 曹红平 钟 彦 刘 军 王一慧 刘 昕 张年辉 刘 科** ( 四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室，成都610064) 摘要 Rdr1 是出芽酵母Saccharomyces cerev is iae 的一个转录抑制因子，参与控制细胞的多重药物耐受性，并可能与细胞胁迫 应答相关 利用PCR 方法扩增RDR1 基因片段，将其克隆至高拷贝表达载体pYES2/NTA 上并诱导Rdr1 蛋白在酵母细胞中 过表达 为了揭示转录抑制因子Rdr1 在胁迫应答中的作用，比较了RDR1 过表达细胞、RDR1 缺失突变体细胞和野生型细 胞在过氧化氢处理、热胁迫和高盐处理条件下的生长状态，结果显示，RDR1 过表达导致细胞对上述3 种胁迫作用更敏感， 而RDR1 缺失则使细胞对这些胁迫作用的耐受性不受影响或有一定增强 为了揭示上述不同细胞在胁迫条件下生长状态的差 异与细胞内抗氧化酶活性之间的关系，测定并比较了RDR1 过表达细胞、RDR1 缺 突变体细胞和野生型细胞中超氧化物岐 化酶(superoxide dismutase SOD)、过氧化氢酶、葡萄糖-6- 磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase G6PDH) 、谷胱甘肽 还原酶(glutathione reductase GR) 的活性 结果表明，RDR1 缺失突变体细胞具高活性的SOD、过氧化氢酶、G6PDH 和GR， 而Rdr1 过表达细胞中 SOD、过氧化氢酶、G6PDH 和GR 的活性较低 RDR1 对 SOD 和过氧化氢酶活性的影响要大于 G6PDH 和GR 细胞抗氧化酶活性的变化初步揭示，RDR1 过表达细胞对胁迫的敏感和RDR1 缺 突变体细胞对胁迫耐受性 增加的原因 为转录抑制因子Rdr1 在胁迫应答中的负调控作用及其机理提供了初步的遗传学和生物化学证据 关键词 Rdr1 ，转录因子，胁迫应答，抗氧化酶 学科分类号 Q81 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.003 18 出芽酵母 作为单细胞 [3] Saccharomyces cerev isiae 养基中生长 ，RDR1 缺 后，与细胞耐药性相关 真核模式生物与哺乳动物细胞在大分子水平上和细 基因的表达量增加了2 倍以上，细胞对药物的抗性 胞器水平上有惊人的相似性，并且很多酵母蛋白与 增加[4] 最近对FL O11 的研究发现，通过表形筛选 高度同源的人类蛋白之间表现出功能上的互换性 出的25 个受转座子插入影响的基因，然而在这些 对酵母细胞信号传导及基因表达调控的研究有助 基因被定向敲除后，有9 个基因并未表现出应有的 于深入了解真核细胞生命活动的基本规律和分子 表型，其中包括RDR1 基因，这表明RDR1 功能的 机制 复杂性[5] 酵母细胞转录抑制因子Rdr1 由546 个氨基酸 通过微阵列分析酵母mRNA 在不同条件下的 组成，分子质量61.29 ku ，是锌簇蛋白Gal4 家族 活性水平，推测RDR1 可能参与细胞的胁迫应 的一员 Gal4 家族是当前研究最广泛的锌簇蛋白 答[6] 生物对胁迫应答的机制在进化上是保守的， 之一，它在酵母的生长、生殖、代谢等过程中起着 对胁迫应答的调节包括转录水平、转录后水平和翻 非常重要的作用，参与糖代谢、糖原异生、呼吸作 译后水平 其中通过转录因子来调节相关基因活性 用、氨基酸代谢、维生素的合成、细胞的有丝分裂 的转录水平