tgf-β1 基因转染bm-msc 对肝癌转移潜能影响的实验研究.pdfVIP

( ) 2014 4 3 2 Funct Mol Med Imaging (Electronic Edition), April 2014,Vol. 3, No.2 功能与分子医学影像学 电子版 年 月第 卷第 期 371 •研究论著• TGF-β1 基因转染 BM-MSC 对肝癌转移潜能 影响的实验研究 李天然，周军，杜湘珂，魏正茂，霍天龙 摘要 目的 TGF-β1 hMSC 【 】 观察经 基因修饰的人骨髓间充质干细胞（ ）对高转移潜能肝癌细胞 MHCC97-H 方法 Gateway Technology TGF-β1 （ ）增殖能力及侵袭能力的影响。 ①利用 法构建 慢病毒载体， eGFP 为报告基因，转染 hMSC ，病毒滴度测定转染率；② Transwell 法检测 hMSC 与肝癌细胞共培养实验， 500 μl 20 FBS 4 hMSC 100 μl 6 下室加入 含 ﹪ 的培养基和 1 × 10 个基因修饰前后 ，上室加入 浓度为 1 × 10 个/ ml MHCC97-H 37 5 CO 48 h 的人高转移肝癌细胞（ ）悬液，小室置于 ℃， ﹪ 2 培养箱内培养 ，结晶紫染色，细胞 计数，检测 MHCC97-H 细胞侵袭能力的变化；③ CCK-8 法检测与 hMSC 共培养前后 MHCC97-H 增殖能力 的变化；④PCR 法检测转基因 hMSC 与 MHCC97-H 细胞共培养前后转移相关因子基因 α-V，肿瘤生长因 TGF-β1 PDCD4 结果 1 hMSC TGF-β1 90 子 和肿瘤凋亡因子 等基因表达。 （） 过表达组细胞的转导率达 ﹪ 2 MHCC97-H MHCC97-H hMSC MHCC97-H 以上。（ ） 细胞增殖能力检测结果：① 与 细胞共培养后， 增殖 hMSC TGF-β1 MHCC97-H 3 MHCC97-H 能力增强；② 基因过表达组对 细胞增殖具有抑制作用。（ ） 细胞侵 袭能力检测结果：① MHCC97-H 与 hMSC 细胞共培养后，侵袭能力增强；② hMSC TGF-β1 基因过表达组 MHCC97-H 4 Q-PCR hMSC TGF-β1 对 细胞侵袭能力具有明显的抑制作用。（ ） 检测结果：① 基因转染组 表 达明显增高；② hMSC 基因转染共培养组 MHCC97-H 细胞 TGF-β1 基因表达明显低于对照组；③ hMSC 基 因转染共培养组MHCC97-H 细胞 α5 基因表达降低；④ hMSC 基因转染共培养组