酶联适体分析法检测葡萄酒中的赭曲霉素a - 食品与生物技术学报.pdfVIP

研究论文RESEARCHARTICLE ZHAOQiuling，etal：Enzyme-LinkedAptamerAssayforDetection ofOchratoxinAinWine 酶联适体分析法检测葡萄酒中的赭曲霉素A 1 2 赵秋伶 ，史素青 （1.辽宁工程技术大学矿业技术学院，辽宁葫芦岛125105；2.西北大学化学与材料学院，陕西西安710069） 摘要：建立了竞争取代酶联适体分析方法，检测葡萄酒中的赭曲霉素A(OTA)。核酸适体和 OTA特异性结合导致与核酸适体杂交的短链DNA解链，解离的DNA作为捕获元素，进一步特 异性结合辣根过氧化物酶(HRP)，HRP催化四甲基二苯胺(TMB)底物显色，测定A nm与浓度 450 的线性关系，确定OTA的检出限。考察了DNA包被浓度、杂交温度和封闭液等因素对检测的影 响。结果表明，在优化的条件下，所建立的竞争取代酶联适体分析法对OTA检测有高灵敏度，检 测限0.88μg/L，线性范围1～100μg/L在葡萄酒中添加时，加标回收率为92.03%～106.6%，相对 标准偏差RSD（n=5）小于2.1%，此方法可用于葡萄酒中OTA的快速测定。 关键词：赭曲霉素A；竞争取代；酶联适体分析；葡萄酒 中图分类号：Ｏ657.1 文献标志码：A 文章编号：1673—1689（2015）04—0396—06 Enzyme-LinkedAptamerAssayforDetectionofOchratoxinAinWine ZHAOQiuling ，SHISuqing1 2 ( 1．CollegeofMiningIndustryTechnology，LiaoningTechnicalUniversity，Huludao 125105，China;2．Collegeof ChemistryMaterialsScience，NorthwestUniversity，Xi’an710069，China) Abstract：ompetitiveenzyme-linkedaptamerassayforOchratoxinA(OTA)detectioninwinewas investigatedinthisstudy.ThebindingofaptamertothetargetOTAresultedinthedissociationofthe DNAshortchainfromtheaptamer,whichwasfurthercapturedbyhorseradishperoxidase(HRP).HRP catalyzed 3,3,5,5.-Tetramethylbenzidine (TMB) substrate and finally leaded to a characteristic changethatwasdetectablebytheabsorptionofultravioletat450nm.ThedetectionlimitofOTAwas determinedbythelinearrelationshipbetweenOTAconcentrationandtheabsorbance.Thefactors influencedtheeffectofdetectionwereinvestigated,includingDNAconcentration,temperatureof hybridization, and blocking buffer solution. This work described th