重组蛋白质纯化技术.pdfVIP

中　国　生 　物 　工 　程 　杂 　志 第 22 卷第 5 期 JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY 2002 年 10 月 重组蛋白质纯化技术 陈　浩 　陈于红 　朱德煦 　刘建宁 (南京大学分子医学研究所 医药生物技术国家重点实验室 　南京 　210093) 摘要 　90 年代以来 ,基因重组技术得到很大的发展 ,基因工程产品的分离纯化的成本约占其 全部成本的60 %～80 % ,因此重组蛋白的分离纯化技术越来越重要 。着重介绍了扩张柱床 吸附层析技术 ,径向膜层析技术 ,灌注层析技术 ,液液萃取技术 ,置换层析技术和金属螯合亲 和层析技术近年来进展情况以及它们的优缺点和应用范围。 关键词 　重组蛋白质 　分离 　纯化 　层析 　色谱 　　近年来随着对蛋白质的研究和生产的需要 , 依据 目标蛋白的物理化学性质摸索和选择一套 基因重组技术突飞猛进 ,出现了很多基因工程产 综合上述方法的适当分离程序 , 以获得较高纯度 品 ,深刻地影响人类自身及其环境 。而作为基因 的制品。 工程技术的下游工程中的基因重组蛋白的分离 表 1 　蛋白质物化性质和分离纯化方法 纯化技术越来越显示其重要性 。据有人统计 ,基 蛋白质的 因工程产品的分离纯化成本约 占到其全部成本 物理和化 分离纯化方法 学性质 的60 %～80 %[ 1] 。因此越来越多的生物工作者 分子的大 密度梯度离心 超滤 透析 分子筛层析 从事重组蛋白的分离纯化工作 。 小和形状 等 ( ) 重组蛋白可在 E . coli 、酵母 、昆虫和哺乳动 等电点和 制备电泳 等电聚焦层析 或电泳 、离子交 电荷 换层析 、吸附层析等 物细胞等体系中得到高效表达 ,其表达形式一般 溶解度 盐溶 、盐析 、有机溶剂沉淀 、等 电点沉淀 、液 ( ) ( ) 可分为 : 1 细胞外的分泌表达 ; 2 细胞内可溶 　 液萃取技术等 性表达 ; (3) 细胞内不溶性表达 , 即产物以包涵体 与其它分子 亲和层析 、金属螯合亲和层析 、共价层析等 [2 ,3 ] 的亲和性 的形式存在 。因此对于重组蛋白的纯化要依 亲疏水性 疏水层析 、反相层析等 据其表达形式的不同 ,采取不同的纯化工艺 。例 如 ,当重组蛋白以包涵体形式存在时 ,就需要对 　　90 年代 以来 , 国内外许多科学工作者在蛋 包涵体进行变复性处理 。然而不论以那种表达 白质分离纯化技术和工艺上进行了大量的研制 形式产生的重组蛋白,其纯化的方法都与传统的 和开发 ,将原有的纯化技术水平提高到一个新的 生物大分子分离方式相似 。 高度 。本文将着重介绍近 10 年来重组蛋白分离 与传统方式相似 ,重组蛋白的分离纯化也是 纯化中常用方法的新进展和一些新出现的技术 。 利用其物理和化学性质的差异 , 即以