凝胶过滤层析精制还原型谷胱甘肽的研究.pdfVIP

开发应用 No．9田 化学与。生物z程2008，V01．25 ChemistryBioengineering 一 凝胶过滤层析精制还原型谷胱甘肽的研究 史玉敏。蔡俊，邱雁临。王伟平 (湖北工业大学生物工程学院，湖北武汉430068) 摘要：采用SephadexG-IO凝胶双柱精制还原型谷胱甘肤(GSH)。研究了脱盐上样体积、分级分离上样浓度及上 样体积对GSH洗脱的影响。结果表明，在脱盐上样体积为10mL、分级分离上样浓度和上样体积分别为10 mg·mL一1 和5mL的优化务件下，所得GSH含量可达92．40％。 关键词：还原型谷胱甘肽；凝胶过滤层析；精制 中图分类号：Q516 文献标识码：A 谷胱甘肽是由L-谷氨酸、L．半胱氨酸和甘氨酸缩 析纯。 合而成的含巯基的生物活性三肽化合物，有还原态 (GSH)和氧化态(GSSH)两种u]。GSH是机体内的 重要活性物质，具有清除自由基、解毒等多种生理功 型核酸蛋白检测仪，上海嘉鹏科学仪器有限公司； 能，对维持生物体内适宜的氧化还原环境尤为重要[2]。 临床主要用于治疗中毒性肝炎和感染性肝炎￡3]，减轻 1．6cm23．5 cm50 化疗的副作用，抑制白内障以及改善角膜与视网膜疾 cm，B柱：垂1．6 am玻璃层析柱， 病[4]，对肺纤维化、肝癌、卵巢癌、艾滋病也是有益的联 武汉华顺科技实业有限公司 合用药药物。 1．2方法 GSH粗品含量约为50％，要得到含量达90％以1．2．1操作流程 上、且未氧化失活的GSH产品，难度大、成本高。凝 A柱上样一洗脱一自动部分收集器收集一A柱 胶过滤层析是根据蛋白质分子大小不同而达到分离效 产品上样B柱一洗脱一自动部分收集器收集一所得 果的，凝胶过滤填料中含有大量微孔，只允许缓冲溶液 产品再次上样B柱一洗脱一自动部分收集器收集一 及小分子量蛋白质通过，而大分子蛋白质及一些蛋白 冷冻干燥一产品一HPLC检测 复合物则被阻挡在外，由于分离过程中不涉及化学键 1．2．2凝胶柱的制备 的变化，因而对蛋白质的活性没有不良影响。另外，该 (1)SephadexG-10的预处理 方法分离纯化效果好、重复性高、样品回收率高(接近 将SephadexG-IO干粉用沸水煮沸3h，然后用 100％)。作者在此选用凝胶过滤层析精制纯化GSH，10倍体积的洗脱液平衡。 并优化了相关工艺条件。 (2)树脂的填装 G-10 A柱(脱盐柱)：加入搅拌均匀的Sephadex 1 实验 浆液，直到凝胶柱床高23．5cm为止，关闭出口。 1．1材料、试剂与仪器 B柱(分级分离柱)：用上述方法装凝胶柱床高为 50 GSH粗品(白色粉末，含量